人參花蕾中人參皂苷的分離純化與生物轉(zhuǎn)化.pdf

1、人參是傳統(tǒng)名貴中藥，始載于我國第一部本草專著《神農(nóng)本草經(jīng)》。人參皂苷作為人參中的主要成分，在心血管系統(tǒng)、腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病的治療中有顯著的療效。人參花蕾是人參的生殖器官。近年研究表明，人參花蕾中含有二十種皂苷活性物質(zhì)，其總皂苷含量比人參根高5倍以上。并含有十七種氨基酸、十幾種多糖組分、多種微量元素、蛋白和揮發(fā)油組分。許多學(xué)者利用現(xiàn)代化的提取和分離技術(shù)，如：超聲波輔助提取、微波輔助提取、CO2超臨界萃取、大孔吸附樹脂法、高效液相制備

2、色譜法和高效逆流色譜法，從西洋參、人參或者三七的根中分離出了人參皂苷、人參多糖等活性成分，而對于人參花蕾中的有效成分提取和分離的研究卻很少。本文主要展開對人參花蕾中有效成分定性和定量的分析，創(chuàng)建了人參花蕾中的人參總皂苷和人參總多糖的聯(lián)合提取工藝，采用正相低壓制備色譜法分離人參花蕾中兩類主要的人參皂苷-原人參二醇型和原人參三醇型皂苷，發(fā)現(xiàn)并通過實(shí)驗(yàn)證明了活性炭對不同種類人參皂苷有選擇吸附性，將這種選擇吸附性與制備型高效液相色譜技術(shù)相結(jié)合，

3、從人參花蕾中分離出高純度的人參皂苷Re，并對人參皂苷的生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行了探索性的研究。
　　 通過泡沫實(shí)驗(yàn)和Salkowski反應(yīng)對人參花蕾提取物的定性分析，檢測出人參花蕾中含有大量的人參皂苷。建立了人參總皂苷和總多糖的定量分析方法。采用高效液相色譜法對人參花蕾中人參單體皂苷的含量進(jìn)行了分析。該分析方法可以達(dá)到很好的分離效果，測定方法簡便、快捷。結(jié)果表明，人參花蕾中主要含有原人參二醇型皂苷(人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd)和原人

4、參三醇型皂苷(人參皂苷Re、Rg1)。
　　 建立了行之有效的人參花蕾總皂苷和人參花蕾總多糖的聯(lián)合提取工藝。此工藝?yán)昧巳藚⒍嗵穷惤M分溶于水但不溶于濃度較高的醇溶液的原理，從人參花蕾中獲得人參總皂苷和總多糖，從而實(shí)現(xiàn)了資源的良好應(yīng)用。采用了超聲輔助提取法，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間的同時(shí)，提高了有效成分的提取率。并通過對超聲輔助提取時(shí)間、次數(shù)、正丁醇萃取次數(shù)和沉降多糖時(shí)乙醇的加入量等影響因素進(jìn)行優(yōu)化，最終建立了一個(gè)穩(wěn)定，快速的實(shí)驗(yàn)工藝流

5、程，此工藝獲得人參花蕾總皂苷粗粉中人參皂苷含量高于90％，人參花蕾總多糖粗粉中多糖組分含量為92％。
　　 利用正相低壓制備色譜技術(shù)，將人參花蕾中兩種主要的人參皂苷(原人參二醇和原人參三醇)分離。首先通過薄層層析技術(shù)，篩選出適合本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相：正丁醇-乙酸乙酯-水。通過選取合適的分離介質(zhì)，流動(dòng)相配比，流速和進(jìn)樣量，得到了最優(yōu)的條件為：選取200-300目的硅膠，流動(dòng)相為正丁醇∶乙酸乙酯∶水(4∶1:5，v∶v/∶v)的體系，最優(yōu)

6、的流速和進(jìn)樣量分別為8 mL/min和400 mg。此分離條件下，原人參三醇類皂苷的純度及收率為81.9％和81.3％。
　　 利用活性炭對人參皂苷具有選擇吸附性的原理對人參花蕾總皂苷粗提液進(jìn)行預(yù)純化，與傳統(tǒng)的方法相比較，本方法具有操作簡單，分離效率高，有機(jī)溶劑消耗率低的特點(diǎn)。采用制備型高效液相色譜純化人參皂苷Re。在反相制備型高效液相色譜上優(yōu)化參數(shù)，確定了最適合制備色譜純化G-Re的流動(dòng)相為乙腈∶水(23∶77，v∶v)。在流

7、速為6 mL/min，上樣量為10 mg時(shí)，人參皂苷Re的純度最高可達(dá)98.5％，人參皂苷Re的純度隨著流速和上樣量的增加而下降。
　　 對人參花蕾總皂苷的生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行了探索性的研究。分析了產(chǎn)紫青霉(Penicillium purpurogenum)β-D-葡萄糖醛酸苷酶的作用機(jī)制和人參皂苷生物轉(zhuǎn)化的原理，通過產(chǎn)紫青霉β-D-葡萄糖醛酸苷酶對人參皂苷中葡萄糖苷鍵的水解作用，將人參花蕾中人參二醇類人參皂苷Rd水解成為人參皂苷Rg3