大鼠供肝熱缺血損傷誘發(fā)肝移植術(shù)后膽汁淤積的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討肝移植中供肝熱缺血損傷誘發(fā)肝移植術(shù)后膽汁淤積的機(jī)制。 方法：建立近交系大鼠動脈化原位肝移植模型，實(shí)驗(yàn)分為4組：熱缺血0分鐘(W0)、熱缺血15分鐘(W15)、熱缺血30分鐘(W30)肝移植組和對照組(C)，每組均為24只大鼠，各組分別在術(shù)后3、7、14和30天各取6只大鼠剖腹獲取肝組織標(biāo)本及取血進(jìn)行定向?qū)嶒?yàn)，并以30天剖殺組觀察術(shù)后存活情況。對所獲取標(biāo)本分別進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)和肝臟酶學(xué)檢查，利用Real-timePCR技術(shù)

2、檢測肝組織標(biāo)本中細(xì)胞角蛋白8、18(cytokeratin，CK)、鈉/?；撬峁餐D(zhuǎn)運(yùn)多肽(Na+/taurocholatecotransporter，NTCP)和膽鹽輸出泵(bilesaltexportpump，BESP)分子mRNA轉(zhuǎn)錄水平，采用免疫組化技術(shù)檢測CK8、CK18、BSEP和Ki-67蛋白的表達(dá)變化，利用激光共聚焦顯微鏡檢測肝細(xì)胞縫隙連接蛋白Cx-32(connexin-32)的變化。 結(jié)果：1.W0、W15和

3、W30組術(shù)后長期生存率分別為100.0％(6/6)、83.3％(5/6)、66.7％(4/6)。 2.常規(guī)組織病理結(jié)果顯示：隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長，移植肝損傷加重，并且恢復(fù)過程也延長。 3.移植組和對照組術(shù)后第3、7、14和30天血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase，ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartatetransaminase，AST)均無顯著性改變。 4.血清堿性磷酸酶(alkal

4、inephosphates，ALP)結(jié)果顯示，隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長，術(shù)后ALP逐漸增高，14天達(dá)到高峰后逐漸下降。術(shù)后第3、7、14、30血清ALP與供肝熱缺血時(shí)間具有顯著相關(guān)性。 5.肝移植術(shù)后早期肝細(xì)胞Ki-67表達(dá)水平隨供肝熱缺血時(shí)間的延長而增高，術(shù)后14天恢復(fù)正常。同樣膽管細(xì)胞Ki-67表達(dá)水平在移植術(shù)后早期也明顯增高，但其下降速度較肝細(xì)胞緩慢。 6.術(shù)后早期，移植組CK8mRNA轉(zhuǎn)錄水平和肝細(xì)胞CK8蛋白表

5、達(dá)水平，隨供肝熱缺血時(shí)間的延長表達(dá)減少，并于術(shù)后14天恢復(fù)正常。CK18mRNA轉(zhuǎn)錄水平和肝細(xì)胞CK18蛋白表達(dá)水平也呈現(xiàn)類似變化。 7.術(shù)后早期，隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長，膽管上皮細(xì)胞CK8和CK18表達(dá)水平逐漸下降，但于術(shù)后7天恢復(fù)正常。 8.移植術(shù)后14天內(nèi)，移植組Cx-32表達(dá)在均明顯低于對照組，且隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長，表達(dá)逐漸下降。 9.移植組與對照組術(shù)后相同時(shí)點(diǎn)不同供肝熱缺血時(shí)間的移植組間的BSE

6、PmRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平無明顯差別。NTCPmRNA轉(zhuǎn)錄水平也呈現(xiàn)類似變化。 結(jié)論：1.近交系大鼠動脈化原位肝移植模型能夠很好的反映肝移植過程中的供肝熱缺血損傷，適合供肝熱缺血誘發(fā)的肝移植術(shù)后膽汁淤積的實(shí)驗(yàn)研究。 2.來自于無心跳供體的大鼠肝臟在熱缺血30分鐘以內(nèi)是安全的，移植術(shù)后可以長期存活。 3.肝移植過程中供肝熱缺血主要損傷肝細(xì)胞，并隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長移植肝細(xì)胞損傷加重，肝細(xì)胞功能恢復(fù)早于其形