農(nóng)桿菌真空滲透轉(zhuǎn)化棉花的研究及轉(zhuǎn)SuSy基因棉花后代的功能驗證.pdf

1、本研究以SuSy基因為供體，棉花為受體材料，就農(nóng)桿菌真空滲透轉(zhuǎn)化法的關(guān)鍵因子進行研究，優(yōu)化該轉(zhuǎn)化方法的技術(shù)體系；并對花粉管通道法得到的轉(zhuǎn)SuSy基因后代的糖含量變化和農(nóng)藝性狀進行研究，確定其在轉(zhuǎn)基因棉花提高纖維品質(zhì)方面的功能和作用。 農(nóng)桿菌真空滲透法影響因素進行研究，結(jié)果表明，花粉在45％蔗糖濃度的花粉懸浮液中能維持適當(dāng)滲透壓，破損率最低；在-80 pa壓力下，菌液OD600值在0.6～1.2范圍內(nèi)，真空滲入時間在15-25 m

2、in內(nèi)，能維持較低花粉破損率及較高瞬間轉(zhuǎn)化率；對滲透的花粉進行GUS瞬時檢測，花粉部分變成藍(lán)色，并觀察到花粉管的伸長，說明抽真空后部分花粉仍有活力。通過本實驗的研究，優(yōu)化了該轉(zhuǎn)化法的技術(shù)體系。利用該方法將SuSy基因轉(zhuǎn)入新陸早19號中，轉(zhuǎn)化后代經(jīng)卡那霉素抗性篩選和PCR檢測，得到18株陽性植株，轉(zhuǎn)化率為0.3％。 通過花粉管通道法得到的轉(zhuǎn)SuSy基因棉花中的整合和表達(dá)進行篩選鑒定，分子檢測結(jié)果說明，得到的轉(zhuǎn)SuSy基因后代為單拷

3、貝的，已穩(wěn)定遺傳，該基因在葉片和纖維中均有不同程度的表達(dá)。比較轉(zhuǎn)SuSy基因植株T5代株系與受體新陸早13號在形態(tài)性狀、產(chǎn)量性狀和品質(zhì)性狀的差異，表明：SuSy基因的導(dǎo)入對棉花各農(nóng)藝性狀有不同程度的影響，各性狀變異系數(shù)增加，其中果枝數(shù)和皮棉產(chǎn)量差異顯著；植株葉片和莖稈的表皮茸毛密集，數(shù)量比對照顯著增加5倍；轉(zhuǎn)基因棉纖維蔗糖含量降低，棉纖維可溶性糖及葡萄糖含量維持較高水平，有利于纖維素的合成和沉積：纖維長度和強度略有增加，馬克隆值降低，品