雙歧和芽孢桿菌屬雙重FQ-PCR建立及SE感染鴨腸道6種優(yōu)勢菌動力學.pdf

1、本研究建立了檢測雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬的雙重實時熒光定量PCR(MultiplexrealtimeFluorescencelouenceQuantitativePCR，MultiplexFQ-PCR)方法，并運用已建立的檢測雙歧桿菌、芽孢桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌和乳酸桿菌屬實時熒光定量PCR(FQ-PCR)方法對經SE不同途徑感染的鴨腸道(十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸)內上述六種菌屬進行定量研究，獲如下結果： 1.建

2、立了定量檢測雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬的雙重實時熒光定量PCR方法，其靈敏度分別達到9CFU/ml和6CFU/ml，具有良好特異性，運用該方法對健康雛鴨腸道內雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬進行定量檢測，證明其具有較好的實用性。 2.FQ-PCR對SE感染雛鴨后其腸道內雙歧桿菌、芽孢桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌和乳酸桿菌屬的定量檢測結果及其變化規(guī)律如下： (1)SE感染雛鴨后，其腸道內雙歧桿菌屬含量檢測結果呈明顯減少趨勢。經皮下注

3、射感染后12h-6d，其含量都顯著低于健康鴨(P＜0.01)；在滴鼻感染后24h-9d都顯著低于健康鴨水平(P＜0.05)；經口服感染后12h-9d，其含量都顯著低于健康鴨(P＜0.05)；在滴鼻和口服感染后6-9d，該菌屬含量在各個腸段中出現(xiàn)回升，只有口服感染后十二指腸內的增加具有顯著性(P＜0.05)，但仍然低于健康鴨。 (2)定量結果顯示，7-16d雛鴨腸道中芽孢桿菌屬定植量都較低。就檢測率而言，SE感染后各腸段內芽孢桿菌

4、低于健康鴨，在十二指腸內，健康鴨該菌屬的檢測率為7/12，經皮下注射感染后檢測率低至1/11。在空腸和回腸中，分別在皮下注射感染后4-8h和24h-6d不能正常檢測出該菌或者檢測的量較低：在十二指腸和盲腸內，健康鴨該菌屬的檢測率分別為7/12和8/12，經滴鼻感染后檢測率分別低至4/12和1/12；在盲腸內，健康鴨該菌屬的檢測率為8/12，口服感染后檢測率低至3/12；在感染后36h，空腸內芽孢桿菌數量顯著低于健康鴨(P＜0.01)。

5、 (3)距感染雛鴨后，其十二指腸內腸球菌數量的主要變化趨勢表現(xiàn)為增加，尤其在皮下注射感染后4-36h(P＜O＜05)，口服感染后12-36h，以及滴鼻感染后4-36h，分別在三種途徑感染后的24h(P＜0.01)，12h(P＜0.01)和24h(P＜0.01)達到峰值；但在皮下注射感染后48h(P＜0.05)呈明顯的遞減趨勢，以后逐漸恢復至初始水平；直腸內腸球菌含量變化也以增加趨勢為主，在皮下注射感染后的4-48h(P＜0.05)

6、，在滴鼻感染后的8-36h(P＜0.05)，在口服感染后的24-36h(P＜0.05)都顯著高于健康鴨水平，隨后也緩慢恢復初始水平。其他腸段內腸球菌數量以減少趨勢為主。 (4)SE感染雛鴨后，其腸道內大腸桿菌屬含量檢測結果呈明顯增加趨勢。經皮下注射感染后，回腸和盲腸內該菌在感染后8-48h顯著高于健康鴨水平(P＜0.05)；經滴鼻感染后，十二指腸內該菌在4-8h(P＜0.05)和36h(P＜0.05)顯著高于健康鴨水平，空腸內該

7、菌數量在4h(P＜0.05)、8h(P＜0.05)、36h(P＜0.05)和72h(P＜0.01)顯著增加；經口服感染后空腸內該菌數量在48h(P＜0.05)顯著增加，盲腸內該菌數量在感染后8-72h顯著高于健康鴨水平(P＜0.05)。 (5)SE經滴鼻和皮下注射感染雛鴨后，其腸道內葡萄球菌屬含量檢測結果呈增加趨勢，但口服感染后呈波狀趨勢。經皮下注射感染后4-8h和24-36h表現(xiàn)為增加趨勢，分別在感染后4h(P＜0.05)和2

8、4h(P＜0.05)出現(xiàn)兩個峰值，但在感染后6d各腸段中數量都低于健康鴨水平；經滴鼻感染后24-72h高于健康鴨水平；經口服感染后十二指腸內該菌數量在24h(P＜0.05)和6d(P＜0.05)出現(xiàn)兩個最低值，空腸內該菌數量在8h(P＜0.05)顯著增加，6d(P＜0.05)出現(xiàn)最低值；回腸和盲腸內該菌數量在4h降低，8-36h出現(xiàn)顯著增長，但在感染后6-9d各腸段中數量都趨于健康鴨水平。 (6)SE感染雛鴨后，其回腸和盲腸內乳