阪崎腸桿菌耐藥性分析、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、本研究參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用藥敏紙片方法，分別對(duì)分離自食品中的19株阪崎腸桿菌進(jìn)行包括頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢呋辛鈉、頭孢吡肟、慶大霉素、妥布霉素、氨曲南、氨芐西林、環(huán)丙沙星、氯霉素、四環(huán)素、苯唑西林、哌拉西林、美洛培南在內(nèi)的共16種常規(guī)抗生素藥敏檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，19株阪崎腸桿菌對(duì)苯唑西林以及頭孢噻吩的耐藥率分別為100％和78.95％，而對(duì)其余種類抗生素均呈現(xiàn)敏感反應(yīng)。另外，

2、本實(shí)驗(yàn)還采用CLSI中關(guān)于腸桿菌科超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，采用紙片擴(kuò)散法對(duì)19株阪崎腸桿菌進(jìn)行了超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)，同時(shí)參照數(shù)據(jù)庫(kù)中超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因序列，采用涵蓋四大類β-內(nèi)酰胺酶，總共10種超廣譜β-內(nèi)酰胺酶擴(kuò)增引物對(duì)菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)，兩種方法均未發(fā)現(xiàn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性菌株，說(shuō)明19株阪崎腸桿菌中不存在超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。綜合以上結(jié)果說(shuō)明，目前食品中存在的阪崎腸桿菌仍為耐藥性較弱的菌種，短時(shí)期內(nèi)將不會(huì)對(duì)臨床治療帶來(lái)

3、較大威脅。
　　 在阪崎腸桿菌耐藥檢測(cè)的基礎(chǔ)上，本論文還對(duì)阪崎腸桿菌耐藥機(jī)制進(jìn)行了初步研究。實(shí)驗(yàn)選取對(duì)頭孢噻吩耐藥性最強(qiáng)的8號(hào)阪崎腸桿菌，利用Tn-5轉(zhuǎn)座子進(jìn)行隨機(jī)突變，以獲得頭孢噻吩耐藥相關(guān)基因，結(jié)果共得到轉(zhuǎn)座成功的阪崎腸桿菌單克隆共108株。以突變前菌株作為參照，通過(guò)抑菌濃度實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)在250μg/mL的頭孢噻吩存在的條件下，生長(zhǎng)受到明顯抑制的阪崎腸桿菌突變株。結(jié)果顯示，共5株阪崎腸桿菌突變株在該濃度頭孢噻吩存在的狀況下，生