血小板膜糖蛋白單克隆抗體洗脫血管內(nèi)支架的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)是治療血管狹窄或閉塞性疾病的主要介入手段，但術(shù)后30％-50％的再狹窄率，嚴(yán)重地影響了其遠(yuǎn)期療效。血管內(nèi)支架置入術(shù)輔以抗凝、抗血小板治療雖能有效地抑制血管急性彈性回縮和血管負(fù)性重塑，但因術(shù)后血管平滑肌細(xì)胞遷移、增殖所致的內(nèi)膜過度增生仍使15％-25％的患者出現(xiàn)了支架再狹窄。許多抗細(xì)胞增殖藥物雖在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中取得了較好的效果，但在臨床實(shí)踐中卻沒有達(dá)到預(yù)期的療效，一個(gè)重要的原因是全身給藥很難在病變血管局部達(dá)到持續(xù)有效的藥物濃

2、度。藥物洗脫支架通過包被于金屬支架表面的聚合物攜帶藥物，當(dāng)支架置入病變部位后，藥物自聚合物中緩慢釋放而在損傷局部發(fā)揮持續(xù)高效的生物學(xué)效應(yīng)，使再狹窄降至10％以下。 目前藥物洗脫支架的研發(fā)主要集中在以下三個(gè)方面：藥物載體材料的選擇和制備、藥物的篩選以及藥物控釋的實(shí)現(xiàn)。本文選用國內(nèi)自主研發(fā)的抗血小板膜糖蛋白Ⅲa 單克隆抗體為洗脫藥物，聚乳酸為藥物載體，利用超聲霧化噴涂和被動(dòng)吸附的方法制備單抗洗脫血管內(nèi)支架。在制備并檢測(cè)了聚合物涂層和

3、單抗洗脫血管內(nèi)支架體外特性的基礎(chǔ)上，應(yīng)用正常兔髂動(dòng)脈置入過大支架的動(dòng)物模型評(píng)價(jià)了單抗洗脫血管內(nèi)支架的生物安全性和防治支架內(nèi)再狹窄的有效性。論文的主要內(nèi)容和結(jié)果如下： ①根據(jù)噴涂方法的特點(diǎn)和超聲霧化的原理，設(shè)計(jì)并實(shí)現(xiàn)了超聲霧化血管支架噴涂裝置。該裝置包括霧化模塊、載氣模塊、載液模塊 (包括噴嘴) 和載支架模塊四個(gè)部分，其中霧化模塊包括投入式霧化器和水槽；載氣模塊包括高壓氮?dú)馄亢蜌饬鞅?，?shí)現(xiàn)對(duì)載氣流量的控制和調(diào)節(jié)；載液模塊和噴嘴為玻

4、璃材質(zhì)，便于霧化聚合物溶液和實(shí)驗(yàn)后儀器的清洗；載支架模塊能夠?qū)崿F(xiàn)噴涂過程中支架的旋轉(zhuǎn)往復(fù)運(yùn)動(dòng)，以利于制備出均勻、穩(wěn)定的聚合物涂層。經(jīng)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該裝置操作簡(jiǎn)便，制備的聚合物涂層均勻、穩(wěn)定，且與支架表面粘附牢固，易于實(shí)現(xiàn)多層涂層的噴涂制備。 ②選擇噴涂參數(shù)設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)超聲霧化噴涂裝置制備聚乳酸涂層進(jìn)行了工藝研究，通過不均勻區(qū)域記數(shù)法確定了適宜的噴涂條件，即噴涂時(shí)間為 30s、聚乳酸濃度為1.0mg/ml、轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速為 50rp

5、m。 ③在適宜噴涂條件下制備聚乳酸涂層，采用熒光染色和掃描電鏡確認(rèn)并分析了聚乳酸涂層在支架表面的分布及其形貌特征，并結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析方法評(píng)價(jià)了涂層的均勻性、孔隙分布、表面粗糙度等性能。另外，對(duì)聚乳酸涂層支架進(jìn)行體外擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)，比較了擴(kuò)張前后支架表面聚乳酸涂層的變化情況，以考察涂層與支架的黏附和力學(xué)性能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明聚乳酸涂層具有良好的孔隙度分布和表面形貌，擴(kuò)張前后與支架的附著良好，涂層無龜裂、脫落或翹起等現(xiàn)象。 ④應(yīng)用免

6、疫熒光的方法對(duì)吸附在聚乳酸涂層中的單抗進(jìn)行染色，以確定單抗在聚乳酸涂層中的吸附；同時(shí)，對(duì)單抗、聚乳酸及其混合物進(jìn)行差示掃描量熱法檢測(cè)，以確定單抗與聚乳酸是否結(jié)合及其結(jié)合方式，從而考察被動(dòng)吸附法制備單抗洗脫血管內(nèi)支架的可行性。結(jié)果表明單抗以被動(dòng)吸附的方式結(jié)合到聚乳酸涂層上，且與聚乳酸涂層載體之間無共聚化反應(yīng)發(fā)生，聚乳酸涂層對(duì)單抗的生物學(xué)活性沒有明顯影響。用掃描電鏡觀察與枸櫞酸鹽抗凝全血接觸后的單抗洗脫支架發(fā)現(xiàn)幾乎沒有血小板的聚集，表明單抗

7、洗脫支架在體外能顯著抑制血小板的聚集。 采用<'125>I放射性標(biāo)記單抗的方法對(duì)單抗在聚乳酸涂層上的吸附以及單抗在一定流量下的釋放進(jìn)行了定量的檢測(cè)。從吸附實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來看，單抗在聚乳酸涂層上的吸附量與單抗溶液的濃度和吸附時(shí)間有關(guān)。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了支架絲在三種不同的單抗?jié)舛戎形?20h的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，最大的單抗吸附量是在2.0mg/ml的單抗溶液中吸附 72h 時(shí)得到的。支架上單抗的釋放時(shí)間可達(dá)到2周以上，不同的制備方法和流量對(duì)藥物的釋放有

8、一定影響。 ⑤將單抗洗脫支架和對(duì)照 316L 不銹鋼裸支架置入兔髂動(dòng)脈，在1、4、12周后，對(duì)置入支架段血管及其兩端的血管段、主要臟器組織和血清，運(yùn)用硬組織切片、掃描電鏡、透射電鏡、免疫組化以及組織染色、生化檢測(cè)等技術(shù)方法對(duì)此單抗洗脫支架的有效性和安全性進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明單抗洗脫支架在 3 個(gè)月的觀察期內(nèi)安全、可靠，同時(shí)能有效防止支架內(nèi)再狹窄和血栓形成，其機(jī)理可能與單抗抑制血小板的粘附和聚集以及加速支架表面內(nèi)皮化和抑制血管平