人紅細胞血型糖蛋白A單克隆抗體的制備.pdf

1、紅細胞血型是指紅細胞膜上特異抗原的類型。紅細胞血型研究不僅能保證安全輸血、挽救生命，同時在法醫(yī)鑒定，遺傳性疾病、癌癥、病毒及寄生蟲疾病的研究中扮演著重要的角色，至20世紀末，國際輸血協(xié)會(ISBT)已將紅細胞抗原分為29個血型系統(tǒng)，600多種抗原決定簇，從而使血型學研究發(fā)展成為一門獨立的學科。除ABO、Rh血型系統(tǒng)外，MN血型系統(tǒng)也是一類重要的紅細胞血型，該系統(tǒng)抗原由位于第4號染色體上的GPA基因編碼，主要有M、N兩個抗原表位，兩者的區(qū)

2、別在于：當GPA分子的N末端1，5位分別為絲氨酸和甘氨酸時，表現為M型抗原，當其相應位置為亮氨酸和谷氨酸時，表現為N型抗原。除此之外，分子中其它氨基酸的序列均相同。MN血型系統(tǒng)抗原抗體不合導致的嚴重輸血反應、新生兒溶血及自身免疫性貧血等病例也時有報道，因此，國外早已將MN血型作為常規(guī)的檢測項目，但因缺乏相關檢測抗體，該檢測在國內各大醫(yī)院和血站均未開展。本研究目的在于通過制備人紅細胞血型糖蛋白A單克隆抗體，從而為MN血型的研究提供可靠的檢

3、測試劑。 本研究通過RT-PCR的方法成功地從K562細胞中擴增了GPA基因，克隆入T載體后，將GPA雙酶切亞克隆入逆轉錄病毒載體pEGZ，用此重組逆轉錄病毒載體轉染293T細胞，收集上清感染L929細胞，Zeocin篩選得到陽性克隆；通過RT-PCR及流式細胞(FCM)等方法對穩(wěn)定轉染GPA的L929細胞進行檢測，以獲得穩(wěn)定表達GPA的L929細胞系。從而為血清中抗GPA特異性抗體的檢測及GPA單克隆抗體的制備和研究奠定基礎。