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文檔簡介
1、紅細(xì)胞血型是指紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。紅細(xì)胞血型研究不僅能保證安全輸血、挽救生命,同時在法醫(yī)鑒定,遺傳性疾病、癌癥、病毒及寄生蟲疾病的研究中扮演著重要的角色,至20世紀(jì)末,國際輸血協(xié)會(ISBT)已將紅細(xì)胞抗原分為29個血型系統(tǒng),600多種抗原決定簇,從而使血型學(xué)研究發(fā)展成為一門獨(dú)立的學(xué)科。除ABO、Rh血型系統(tǒng)外,MN血型系統(tǒng)也是一類重要的紅細(xì)胞血型,該系統(tǒng)抗原由位于第4號染色體上的GPA基因編碼,主要有M、N兩個抗原表位,兩者的區(qū)
2、別在于:當(dāng)GPA分子的N末端1,5位分別為絲氨酸和甘氨酸時,表現(xiàn)為M型抗原,當(dāng)其相應(yīng)位置為亮氨酸和谷氨酸時,表現(xiàn)為N型抗原。除此之外,分子中其它氨基酸的序列均相同。MN血型系統(tǒng)抗原抗體不合導(dǎo)致的嚴(yán)重輸血反應(yīng)、新生兒溶血及自身免疫性貧血等病例也時有報道,因此,國外早已將MN血型作為常規(guī)的檢測項(xiàng)目,但因缺乏相關(guān)檢測抗體,該檢測在國內(nèi)各大醫(yī)院和血站均未開展。本研究目的在于通過制備人紅細(xì)胞血型糖蛋白A單克隆抗體,從而為MN血型的研究提供可靠的檢
3、測試劑。 本研究通過RT-PCR的方法成功地從K562細(xì)胞中擴(kuò)增了GPA基因,克隆入T載體后,將GPA雙酶切亞克隆入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pEGZ,用此重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集上清感染L929細(xì)胞,Zeocin篩選得到陽性克隆;通過RT-PCR及流式細(xì)胞(FCM)等方法對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPA的L929細(xì)胞進(jìn)行檢測,以獲得穩(wěn)定表達(dá)GPA的L929細(xì)胞系。從而為血清中抗GPA特異性抗體的檢測及GPA單克隆抗體的制備和研究奠定基礎(chǔ)。
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