孕酮對(duì)體外三維立體培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜細(xì)胞胞飲突形成的影響.pdf

1、目的： 分離純化人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、腔上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞，建立體外子宮內(nèi)膜細(xì)胞的三維立體培養(yǎng)模型，利用該模型進(jìn)行胚胎植入及子宮內(nèi)膜容受性機(jī)制的研究，觀察不同濃度孕酮對(duì)體外三維立體培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胞飲突形成的影響，為臨床體外受精一胚胎移植后黃體期孕酮補(bǔ)充劑量的選擇提供理論依據(jù)。 方法: 選取2006年3～6月份因子宮肌瘤在中國(guó)醫(yī)大盛京醫(yī)院行全子宮切除術(shù)及次全子宮切除術(shù)的婦女，年齡20～45歲、月經(jīng)周期規(guī)律

2、(24～35天)、術(shù)前3個(gè)月內(nèi)無激素應(yīng)用史，增生期子宮內(nèi)膜(月經(jīng)7～14天)，術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)且內(nèi)膜無病變。子宮離體后，立即在手術(shù)室，無菌條件下用刮匙刮取子宮內(nèi)膜，消化后篩網(wǎng)分離取得上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，然后利用其不同貼壁時(shí)間進(jìn)行純化，培養(yǎng)3～5天后，將其三維立體培養(yǎng)，培養(yǎng)物分三層，最底層為膠原與問質(zhì)細(xì)胞混合物，其上為一薄層Matrigel膠，最上層為腺上皮細(xì)胞，培養(yǎng)重建子宮內(nèi)膜，培養(yǎng)液中給予不同濃度的孕激素，10<'-8>mol/L、10

3、<'-7>mol/L，不加孕激素做陰性對(duì)照，雌激素濃度均為10<'-9>mol/L，光鏡下觀察細(xì)胞三維結(jié)構(gòu)，掃描電鏡觀察細(xì)胞表面形態(tài)及胞飲突形成情況，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果: 分離純化后原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞呈旋渦狀生長(zhǎng)，其純度達(dá)92％，子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞呈梭形生長(zhǎng)，純度可達(dá)95％以上；光鏡下見三維培養(yǎng)的腺上皮細(xì)胞單層柱狀生長(zhǎng)，細(xì)胞有極性，間質(zhì)細(xì)胞于其下散在生長(zhǎng)；掃描電鏡可見上皮細(xì)胞融合，加孕激素上皮表面可見

4、胞飲突結(jié)構(gòu)，不加孕激素未見胞飲突形成，不同濃度孕激素胞飲突形成數(shù)目無明顯差異，均覆蓋細(xì)胞表面積的5％左右，透射電鏡超微結(jié)構(gòu)可見腺上皮細(xì)胞間緊密連接與縫隙連接及橋粒連接，并可見細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及胞質(zhì)內(nèi)豐富的分泌顆粒。 結(jié)論: 人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞分離效果好，細(xì)胞純度高，利用增殖期的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)可以建立子宮內(nèi)膜的三維立體模型；證明了胞飲突形成依賴孕激素的作用；而且孕激素誘導(dǎo)胞飲突形成具有飽和作用