氯霉素分子印跡聚合物的合成及應(yīng)用.pdf

1、分子印跡技術(shù)（molecularly imprinting technique）是對目標(biāo)化合物具有特定識別能力的一種聚合物制備技術(shù)。分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）是一種具有較強(qiáng)分子識別能力的新型高分子仿生材料，其具有類抗體的特異性、高選擇性、高強(qiáng)度等優(yōu)點(diǎn)，另外還具有制備簡單、成本低、模板分子可回收重復(fù)利用等特點(diǎn)，使其在色譜分離、傳感器、模擬酶催化、膜分離及固相萃取等許多領(lǐng)域得到了

2、廣泛的應(yīng)用。 氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一種殺菌力極強(qiáng)的廣譜抗生素，由于其優(yōu)良的抗菌性、穩(wěn)定的藥性、低廉的價(jià)格，而廣泛作為飼料添加劑，用于治療細(xì)菌性疾病。但研究發(fā)現(xiàn)CAP對骨髓和新生兒有較大的毒性，易引起人體血中毒，導(dǎo)致不可逆的再生障礙性貧血等嚴(yán)重的毒副作用，對人類的健康構(gòu)成巨大的潛在威脅。因此，歐盟、美國均在法規(guī)中規(guī)定CAP的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為“零容許量”。我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定CAP及其鹽、脂等在食品動物的所有可

3、食組織中不得檢出。CAP的檢測方法主要有微生物法、免疫分析法、氣相色譜法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、超臨界流體色譜法以及免疫熒光毛細(xì)管電泳技術(shù)等等。由于樣品中的CAP殘留濃度低，基體成分復(fù)雜，且常規(guī)樣品前處理方法步驟繁瑣，嚴(yán)重限制了常規(guī)快速檢測方法和儀器分析方法對樣品中CAP殘留的有效檢測。 樣品的提取、富集和凈化是殘留物分析的關(guān)鍵步驟，固相萃取（solid-phase extraction，SPE）、基質(zhì)固相分散（matrixsolid

4、-phase dispersion，MSPD）等樣品預(yù)處理技術(shù)近年來得到了越來越廣泛的應(yīng)用。SPE是獸藥殘留分析常用的樣品處理與富集方法之一。常規(guī)的基于反相或離子交換作用的固相萃取材料在獸藥殘留檢測應(yīng)用中往往選擇性較差，給后面的儀器分析造成困難。利用MIP的分子識別能力，將其作為固相萃取材料，可望實(shí)現(xiàn)有選擇的固相萃取，克服生物樣品體系復(fù)雜、預(yù)處理手續(xù)繁瑣等因素，在富集待分析物的同時，除去大部分干擾組分，從而方便儀器分析，是發(fā)展痕量分析方

5、法的重要途徑。MSPD是一種新的樣品處理技術(shù)，其基本操作是將樣品（固態(tài)或液態(tài)）直接與固相萃取材料一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒的表面，形成獨(dú)特的色譜固定相裝柱，然后依靠所選定的溶劑洗脫樣品。它濃縮了傳統(tǒng)樣品的均化、組織細(xì)胞裂解、提取、過濾、凈化等過程，使樣品的預(yù)處理變得簡單快捷，不僅測試樣品和溶劑用量減少，而且也避免了目標(biāo)物的損失。 本研究以氯霉素（CAP）為模板分子，甲基丙烯酸二乙氨基乙酯（DEAEM）為功能單體，乙

6、二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）為交聯(lián)劑，偶氮二乙丁腈（AIBN）為引發(fā)劑，四氫呋喃為溶劑，采用本體聚合的方法制備氯霉素分子印跡聚合物（CAP-MIP），通過吸附動力學(xué)曲線等優(yōu)化了聚合物的合成條件，由此制備的MIP對CAP有很好的吸附能力，通過將MIP對CAP、甲砜霉素（thiamphenicol，TAP）和氟甲砜霉素（florfenicol，F(xiàn)F）的吸附性進(jìn)行比較研究，顯示由此方法制備的CAP-MIP對CAP有較好的特異性吸附能力。

7、 將上述方法制備的CAP-MIP作為填料建立了CAP的分子印跡固相萃取方法，結(jié)果表明：CAP-MIP對CAP的吸附率高于94.7％，CAP-MIP的最大吸附量達(dá)4670μg/g。同時，本研究首次將CAP-MIP作為基體固相擴(kuò)散吸附劑（MIP-MSPD）分離富集牛奶中的氯霉素殘留，使用MIP-MSPD和HLB固相萃取柱共同處理樣品以及僅用MJP-MSPD兩種方法處理樣品。最終用HPLC進(jìn)行檢測。在優(yōu)化條件下，不使用固相萃取柱凈化的方法

8、的檢出限為0.15ng/mL，定量限為0.5ng/mL。不同氯霉素添加量的平均回收率高于89.7％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10.1％。該方法操作簡單快速，準(zhǔn)確度好，精密度高且無需大量有機(jī)溶劑。 在本體聚合方法合成CAP-MIP的基礎(chǔ)上，利用沉淀聚合法合成了CAP分子印跡聚合物微球（（molecularly imprinted polymeric microspheres，MIPM）。由于本體聚合法得到的大塊聚合物需要研磨粉碎，費(fèi)時費(fèi)力