阿魏酸化學(xué)修飾溶菌酶及擴(kuò)展抑菌譜的研究.pdf

1、在自然界，蛋清中的溶菌酶(Lysozyme，Lys)(E.C.3.2.1.1)含量最豐富，它可以作用于細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖，進(jìn)而殺死細(xì)菌。由于溶菌酶本身是一種天然蛋白質(zhì)，對(duì)人體無(wú)任何毒害作用，可以代替很多傳統(tǒng)的化學(xué)防腐劑，目前已被很多國(guó)家和組織批準(zhǔn)作為食品防腐劑或保鮮劑使用。
　　 但是溶菌酶通常對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有很強(qiáng)的抑制作用，而對(duì)革蘭氏陰性菌無(wú)效或者效果很差，這就限制了它作為天然防腐劑的應(yīng)用潛力。為了使溶菌酶擴(kuò)展抑菌譜，同時(shí)作用

2、于革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，本文采用了共價(jià)結(jié)合阿魏酸(Ferulicacid，F(xiàn)A)以修飾天然溶菌酶的方法，其原理是在1-乙基-3(二甲基胺丙基)碳二亞胺(EDAC)存在時(shí)，利用有機(jī)酸上的羧基與蛋白質(zhì)上的游離氨基反應(yīng)形成一種氨基化合物。
　　 本文首先研究了阿魏酸修飾酶(FA-Lys)的制備，分析修飾情況，結(jié)果顯示:阿魏酸與溶菌酶按1:4和1:1配比反應(yīng)制得的樣品FA-Lys溶解性良好。采用陽(yáng)離子交換層析分離修飾酶與未修飾酶，

3、利用三硝基苯磺酸酸(TNBS)法測(cè)得平均氨基修飾度分別為41.2%和47.5%。
　　 隨后研究了FA-Lys的活性以及穩(wěn)定性，并以天然溶菌酶作為對(duì)照。結(jié)果顯示:天然溶菌酶經(jīng)過(guò)阿魏酸修飾后，酶活有所降低。在酸性條件下，F(xiàn)A-Lys熱穩(wěn)定性良好。而pH值對(duì)其影響較明顯，溶菌酶修飾前后，最適pH值降低，這可能與修飾后溶菌酶的等電點(diǎn)變化有關(guān)。在對(duì)FA-Lys的結(jié)構(gòu)性狀研究中，測(cè)得修飾酶FA-Lys的表面疏水性比天然溶菌酶增加，表面疏水

4、性的增加對(duì)FA-Lys作用于革蘭氏陰性菌提供了一定的理論依據(jù)。對(duì)照FA-Lys與天然溶菌酶的紫外吸收光譜和圓二色光譜，可見(jiàn)溶菌酶共價(jià)結(jié)合阿魏酸后，天然酶的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，肽鏈伸展，α-螺旋與β-構(gòu)象都有所減少，無(wú)規(guī)卷曲的含量有所增加，F(xiàn)A-Lys的分子構(gòu)象趨于松散，這就可能導(dǎo)致修飾酶穩(wěn)定性下降，而且酶分子不能有效的結(jié)合底物，使得活性發(fā)生一定程度的下降。
　　 最后，以金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaueres)、