阿魏酸化學修飾溶菌酶及擴展抑菌譜的研究.pdf

1、在自然界，蛋清中的溶菌酶(Lysozyme，Lys)(E.C.3.2.1.1)含量最豐富，它可以作用于細菌細胞壁的肽聚糖，進而殺死細菌。由于溶菌酶本身是一種天然蛋白質，對人體無任何毒害作用，可以代替很多傳統(tǒng)的化學防腐劑，目前已被很多國家和組織批準作為食品防腐劑或保鮮劑使用。
　　 但是溶菌酶通常對革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用，而對革蘭氏陰性菌無效或者效果很差，這就限制了它作為天然防腐劑的應用潛力。為了使溶菌酶擴展抑菌譜，同時作用

2、于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，本文采用了共價結合阿魏酸(Ferulicacid，FA)以修飾天然溶菌酶的方法，其原理是在1-乙基-3(二甲基胺丙基)碳二亞胺(EDAC)存在時，利用有機酸上的羧基與蛋白質上的游離氨基反應形成一種氨基化合物。
　　 本文首先研究了阿魏酸修飾酶(FA-Lys)的制備，分析修飾情況，結果顯示:阿魏酸與溶菌酶按1:4和1:1配比反應制得的樣品FA-Lys溶解性良好。采用陽離子交換層析分離修飾酶與未修飾酶，

3、利用三硝基苯磺酸酸(TNBS)法測得平均氨基修飾度分別為41.2%和47.5%。
　　 隨后研究了FA-Lys的活性以及穩(wěn)定性，并以天然溶菌酶作為對照。結果顯示:天然溶菌酶經過阿魏酸修飾后，酶活有所降低。在酸性條件下，FA-Lys熱穩(wěn)定性良好。而pH值對其影響較明顯，溶菌酶修飾前后，最適pH值降低，這可能與修飾后溶菌酶的等電點變化有關。在對FA-Lys的結構性狀研究中，測得修飾酶FA-Lys的表面疏水性比天然溶菌酶增加，表面疏水

4、性的增加對FA-Lys作用于革蘭氏陰性菌提供了一定的理論依據。對照FA-Lys與天然溶菌酶的紫外吸收光譜和圓二色光譜，可見溶菌酶共價結合阿魏酸后，天然酶的分子結構發(fā)生變化，肽鏈伸展，α-螺旋與β-構象都有所減少，無規(guī)卷曲的含量有所增加，FA-Lys的分子構象趨于松散，這就可能導致修飾酶穩(wěn)定性下降，而且酶分子不能有效的結合底物，使得活性發(fā)生一定程度的下降。
　　 最后，以金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaueres)、