馬氏珠母貝抗多毛類(lèi)寄生蟲(chóng)病候選基因的篩選.pdf

1、馬氏珠母貝[Pinctadamartensii(Dunker)]，又稱(chēng)合浦珠母貝，是培育海水珍珠的主要貝類(lèi)，已成為廣東、廣西和海南等沿海部分地區(qū)的支柱產(chǎn)業(yè)。馬氏珠母貝養(yǎng)殖業(yè)一直受到多毛類(lèi)寄生病--鑿貝才女蟲(chóng)(Polydoraciliata)的危害，這種多毛類(lèi)寄生病極大地影響了海水珍珠產(chǎn)量和質(zhì)量，嚴(yán)重地制約著我國(guó)珍珠養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。因此，本研究通過(guò)抗病基因的篩選，為防治多毛類(lèi)寄生蟲(chóng)病提供了一種新方法。 本文以感病和健康馬氏珠母貝

2、的mRNA為實(shí)驗(yàn)材料，構(gòu)建了馬氏珠母貝感病SMARTcDNA血液文庫(kù)1097個(gè)克隆，健康SMARTcDNA血液文庫(kù)1254個(gè)克隆。將地高辛標(biāo)記的總RNA為探針，篩選文庫(kù)的克隆，共得到416個(gè)陽(yáng)性克隆。按照顯色光密度相差5倍的原則，在陽(yáng)性克隆中共挑選差異克隆66個(gè)，其中感病的馬氏珠母貝血液文庫(kù)中呈陽(yáng)性的克隆有33個(gè)，健康馬氏珠母貝血液文庫(kù)中呈陽(yáng)性的克隆也有33個(gè)。 將挑選的66個(gè)差異克隆測(cè)序，得到58個(gè)測(cè)序結(jié)果，有8個(gè)測(cè)序失敗。將

3、測(cè)序獲得的序列在NCBI上進(jìn)行在線(xiàn)序列分析(去除載體序列、BLASTx、BLASTn、ORF、查找與數(shù)據(jù)庫(kù)中其它物種已知序列的同源性、搜索開(kāi)放閱讀框、推斷可能的氨基酸序列)，并用CLustalX1.8軟件進(jìn)行序列比對(duì)。結(jié)果顯示它們分別與29個(gè)已知基因具有不同程度的相似性，并根據(jù)這29個(gè)的基因片段設(shè)計(jì)了26個(gè)基因特異性引物，做RT-PCR。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，賴(lài)氨酸羥化酶基因、Profilin基因、細(xì)胞色素氧化酶基因、金屬硫蛋白基因、檢驗(yàn)點(diǎn)激酶基因