CpG ODN1826對小鼠放射性肺損傷作用研究.pdf

1、肺癌是世界上許多國家常見的惡性腫瘤之一，已經(jīng)成為人類因腫瘤致死的首位病因。放射治療是肺癌治療的重要手段之一，但目前的臨床療效不是很理想，主要原因包括肺癌細胞放射敏感性低以及放射性治療產(chǎn)生的肺損傷，這是影響腫瘤靶區(qū)劑量乃至局部控制率的重要制約因素。CpG ODN(unmcthylatedcytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides，CpG ODN)是以CpG二核苷酸為核心的未甲基化的特殊的

2、DNA序列，它可以特異性激活TLR9(toll-likereceptor9，TLR9)受體，具有介導(dǎo)免疫的作用。CpG ODN的免疫作用存在種屬特異性，對動物具有最佳刺激活性的是CpG ODN1826（包含序列GACGTT）?；A(chǔ)研究證實，CpG ODN1826對肺癌具有明顯放射增敏作用，很有潛力成為臨床上新型的肺癌放射增敏劑。然而CpG ODN1826在提高肺癌放射敏感性的同時是否也會提高肺癌周圍正常肺組織對放射線的敏感性，從而引起或

3、加重放射性肺損傷？關(guān)于這方面的研究，國內(nèi)外尚少見。
　　本課題組建立了放射性肺損傷小鼠模型，以CpGODNI826干預(yù)放射性肺損傷小鼠，觀察CpG ODN1826對小鼠放射性肺損傷的作用，并初步探討CpG ODN1826在小鼠放射性肺損傷過程中的作用機理。以O(shè)DN作為陰性對照，ICR小鼠完全隨機分為空白對照組、RT(Radiation)組、CpG組、RT+CpG(Radiation combined withCpG ODN1826

4、)組、ODN組及RT+ODN(Radiation combined with ODN)組6組，每組小鼠40只。RT組、RT+CpG組和RT+ODN組左肺單次照射6MV X射線20Gy，在照后0、1、3、5和7d，空白對照組和RT組每次腹腔注射生理鹽水0.2ml，CpG組和RT+CpG組每次腹腔注射CpG ODN1826溶液0.2ml，ODN組和RT+ODN組每次腹腔注射ODN溶液0.2ml。RT組、RT+CpG組及RT+ODN組小鼠10

5、％水合氯醛溶液按0.004ml/g體積質(zhì)量腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后以自行設(shè)計的固定及屏蔽裝置行直線加速器照射。6MV X射線單次照射小鼠左肺20Gy，照射量率2.0Gy/min，源皮距100cm，照射前照射靶區(qū)模擬機下精確定位，照射野大小為2cm×2cm，包括整個左肺。每組小鼠于照射后第1、5、15、30和90d處死取材。記錄小鼠死亡數(shù)目及死亡時間，解剖探查小鼠死亡原因。記錄小鼠濕肺重量及體重，計算肺系數(shù)，同時每組小鼠行外觀評分。制作小鼠

6、照射肺石蠟切片，行HE染色及Masson染色，光鏡下觀察小鼠放射性肺炎及放射性肺纖維化情況，進行小鼠放射性肺炎評分及放射性肺纖維評分。ELISA法檢測每組小鼠血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的濃度。堿化水解法檢測小鼠左肺組織中羥脯氨酸(Hyp)含量。Real time PCR方法檢測小鼠左肺組織中MnSOD基因及FoxP3基因的相對mRNA

7、濃度。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對照組、CpG組及ODN組小鼠無死亡，RT組小鼠死亡5只，RT+ODN組小鼠死亡5只，RT+CpG組小鼠死亡4只，解剖發(fā)現(xiàn)小鼠死因均為嚴重的肺炎。K-M生存曲線分析顯示，各照射組小鼠生存率之間統(tǒng)計學(xué)差異。照射5d后，小鼠體重下降明顯，15d后體重有所恢復(fù)但仍低于未照射組。照射30d后，RT+CpG組小鼠體重恢復(fù)明顯。未照射組小鼠外觀評分均高于照射組，RT+CpG組小鼠外觀評分高于另外RT組及RT+ODN組。這說明

8、CpG ODN1826有利于恢復(fù)小鼠體重及改善生小鼠生活狀態(tài)。光鏡下觀察小鼠左肺病理切片發(fā)現(xiàn)，RT+CpG組小鼠左肺肺炎及肺纖維化程度不及RT組及RT+ODN組明顯。RT+CpG組肺炎評分及肺纖維評分均低于RT組及RT+ODN組。RT組及RT+ODN組小鼠血清MDA、TGF-β1、TNF-α濃度高于RT+CpG組。RT組及RT+ODN組小鼠血清SOD、GSH濃度低于RT+CDG組。RT組及RT+ODN組小鼠照射肺Hyp含量高于RT+Cp

9、G組小鼠。RT+CpG組小鼠MnSOD基因表達量高于RT和RT+ODN組。CpG組MnSOD基因表達量高于對照組和ODN組。相反的，RT+CpG組FoxP3基因表達量低于RT和RT+ODN組。CpG組FoxP3基因表達量低于對照組和ODN組。這些結(jié)果表明，CpGODN1826上調(diào)了抗氧化基因MnSOD的表達，生成抗氧化蛋白-MnSOD增多，增加了清除活性氧(reactive oxygen species，ROS)能力，從而減小了ROS所