惡性黑素瘤中SOX4的表達及其對Wnt-β-catenin信號途徑作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分 SOX4在人惡性黑素瘤組織中的表達
   目的:研究SOX4在人類惡性黑素瘤組織中的表達情況,探討SOX4與惡性黑素瘤之間可能存在的關系。
   方法:用免疫組化SP 法檢測30例惡性黑素瘤組織中的SOX4的表達情況。
   結果:在惡性黑素瘤組織中,腫瘤細胞的細胞核內可見棕黃色至深褐色顆粒,胞漿也可著色。30例惡性黑素瘤組織中,有17例SOX4表達為陽性,陽性率為56.7%,而正常人皮膚組織中未見陽性

2、表達,兩組間SOX4表達陽性率具有顯著性差異。
   結論:在惡性黑素瘤組織中SOX4 出現異常的陽性表達,SOX4 可能與惡性黑素瘤的發(fā)病機制有關。
   第二部分采用RNA 干擾技術抑制惡性黑素瘤細胞中SOX4的表達并研究其對Wnt/β-catenin 信號途徑活性的影響
   目的:研究惡性黑素瘤A375細胞中SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑中Wnt3A及β-catenin的表達的影響以及對

3、Wnt/β-catenin 信號途徑活性的影響,探討惡性黑素瘤A375細胞中SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑的調控作用及其可能的機制。
   方法:采用RNA 干擾技術,將兩段SOX4 siRNA 導入惡性黑素瘤A375細胞,使SOX4基因沉默,分別采用實時熒光定量PCR法和蛋白質印跡法檢測干擾后Wnt/β-catenin 信號途徑中Wnt3A 及β-catenin的mRNA 及蛋白表達情況的變化,并采用TOPf

4、lash/FOPflash 雙質粒報告基因系統(tǒng)檢測惡性黑素瘤A375細胞中Wnt/β-catenin 信號途徑活性隨RNA 干擾變化的情況。
   結果:本研究使用的兩段SOX4 siRNA 均成功轉染惡性黑素瘤A375細胞并有效抑制SOX4基因表達,發(fā)揮了對SOX4的基因沉默作用。轉染SOX4 siRNA 對Wnt3A的mRNA 及蛋白表達水平無顯著影響,對β-catenin的mRNA表達水平亦無顯著性影響,但使得細胞內β-c

5、atenin蛋白量減少。同時,轉染了SOX4 siRNA的A375內Wnt/β-catenin信號途徑活性較轉染非特異性siRNA的A375細胞及空白對照組為低,差異具有顯著性。
   結論:在惡性黑素瘤A375細胞中,SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑具有正向調控作用,這種調控作用與β-catenin 有關。SOX4 上調A375細胞中β-catenin蛋白含量,其作用發(fā)生在轉錄后水平,可能是SOX4 抑制β-c

6、atenin 降解的結果,也有可能與轉錄后調控或翻譯調控等有關。
   第三部分 SOX4 siRNA 對惡性黑素瘤細胞中Survivin的表達及細胞增殖的影響
   目的:研究SOX4 對惡性黑素瘤A375細胞中Wnt/β-catenin 信號途徑的靶基因Survivin的基因表達的影響及對A375細胞增殖活力的影響。
   方法:分別用實時熒光定量PCR法和蛋白質印跡法檢測RNA 干擾后A375細胞Survi

7、vin的mRNA 及蛋白表達水平的變化;用MTT 法檢測A375細胞的增殖活力。
   結果:
   (1)SOX4 siRNA 使得A375細胞Survivin的mRNA 及蛋白表達水平均顯著下降。
   (2)轉染了SOX4 siRNA的A375細胞增殖活力較對照組明顯下降。
   結論:SOX4 對惡性黑素瘤A375細胞的增殖具有促進作用,其機制可能與SOX4增強Wnt/β-catenin 信號途徑

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