變性高效液相色譜對(duì)CTX-M型ESBLs基因分型研究.pdf

1、目的:通過(guò)與基因測(cè)序法進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估變性高效液相色譜（denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLC）對(duì)CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extended spectrumβ-lactamase，ESBLs）進(jìn)行基因分型的準(zhǔn)確性，并運(yùn)用DHPLC方法檢測(cè)CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因型，從而了解中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院的CTX-M型ESBLs基因型分布情況。 方法:從

2、中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院收集171株多重耐藥腸桿菌科細(xì)菌，按臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI2006）所推薦的方法進(jìn)行表型確證試驗(yàn)，采用多重PCR對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株和ESBLs表型陽(yáng)性的臨床菌株進(jìn)行blaCTX-M擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DHPLC分析后得到標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株色譜峰圖，通過(guò)比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株色譜峰圖對(duì)臨床菌株進(jìn)行基因分型。同時(shí)選擇25株多重PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的菌株進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物用基因測(cè)序法確定基因型。最后通過(guò)比對(duì)基因測(cè)序和DHPLC這兩種

3、方法對(duì)25株臨床菌株的基因分型結(jié)果，來(lái)評(píng)估變性高效液相色譜法對(duì)CTX-M型ESBLs進(jìn)行基因分型的準(zhǔn)確性。 結(jié)果:171株多重耐藥腸桿菌科細(xì)菌經(jīng)表型確證試驗(yàn)確認(rèn)有142株臨床菌株ESBLs表型陽(yáng)性。經(jīng)多重PCR擴(kuò)增證實(shí)，142株腸桿菌中109株攜帶blaCTX-M基因，52株為CTX-M-1組產(chǎn)物，57株為CTX-M-9組產(chǎn)物，檢出率達(dá)76.8％（109/142）。其中，大腸埃希菌攜帶blaCTX-M基因的比例最高，其次是肺炎克

4、雷伯菌和陰溝腸桿菌。109株臨床菌株的多重PCR產(chǎn)物經(jīng)DHPLC分析后檢出4種不同的blaCTX-M基因型：33株攜帶CTX-M-3、19株攜帶CTX-M-15、5株攜帶CTX-M-9、52株攜帶CTX-M-14。25株多重PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的臨床菌株進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，有14株為CTX-M-1組產(chǎn)物，11株為CTX-M-9組產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)基因測(cè)序后顯示四種基因型：blaCTX-M-15、blaCTX-M-3、blaCTX-M-14及blaC

5、TX-M-82。25株臨床菌株的基因測(cè)序結(jié)果與DHPLC基因分型結(jié)果作比較發(fā)現(xiàn)，24株DHPLC的基因分型結(jié)果與基因測(cè)序結(jié)果完全吻合，但是有1株DHPLC基因分型結(jié)果為CTX-M-15而基因測(cè)序結(jié)果為CTX-M-82。 結(jié)論:（1）DHPLC利用特殊的DNA色譜柱在部分變性溫度條件下操作，可以通過(guò)比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰圖對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行基因分型，并且經(jīng)基因測(cè)序法證實(shí)運(yùn)用DHPLC對(duì)blaCTX-M基因進(jìn)行分型具有準(zhǔn)確、快速和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，是