前軟骨干細(xì)胞在自組裝肽-PLGA復(fù)合支架中成軟骨分化的效果研究.pdf

1、【目的】軟骨組織損傷修復(fù)仍是臨床和科研的難題，而組織工程學(xué)為其提供了思路，且其焦點(diǎn)集中于不斷優(yōu)化材料和其相關(guān)細(xì)胞因子的條件?；诖?，本實(shí)驗(yàn)嘗試使用將PLGA和自組裝肽復(fù)合后制備多孔支架三維材料，同時(shí)結(jié)合前期研究的含TGFβ3基因質(zhì)粒作為細(xì)胞刺激因子，從而觀察研究前軟骨干細(xì)胞在此復(fù)合支架中的向軟骨方向分化的能力。
　　【方法】免疫磁珠分選法分離培養(yǎng)FGFR-3陽(yáng)性的前軟骨干細(xì)胞，將其種植于包被有多聚賴氨酸PLL的PLGA和自組裝肽的

2、復(fù)合支架中，并以NLS-TAT非病毒載體和編碼TGFβ3的質(zhì)粒DNA作為細(xì)胞刺激因子裝載于復(fù)合材料中，且將不含質(zhì)粒DNA和NLS-TAT的作為對(duì)照組。在體外培養(yǎng)4周后，分別提取與軟骨生成相關(guān)的基因如Sox9、Aggrecan、Collagen II的RNA，通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)水平；同時(shí)提取復(fù)合體中的蛋白使用Western bloting測(cè)定TGFβ3的表達(dá)蛋白。復(fù)合體經(jīng)過(guò)固定后通過(guò)HE染色、免疫組織化學(xué)法等方法檢測(cè)細(xì)

3、胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)，PLGA、自組裝肽的相關(guān)材料的毒性和特性以及與細(xì)胞在其中生長(zhǎng)狀況加以檢測(cè)和證實(shí)。
　　【結(jié)果】PLGA材料對(duì)于前軟骨干細(xì)胞無(wú)明顯的毒性，且細(xì)胞可以很好地黏附生長(zhǎng)于多聚賴氨酸包被的PLGA和自組裝肽凝膠狀中。在實(shí)驗(yàn)組中Sox9、Aggrecan、Collagen II基因表達(dá)水平隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)有不同程度的升高，TGFβ3的蛋白表達(dá)也依次增強(qiáng)。免疫組化染色的結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組有較多Coll