前軟骨干細胞在自組裝肽-PLGA復合支架中成軟骨分化的效果研究.pdf

1、【目的】軟骨組織損傷修復仍是臨床和科研的難題，而組織工程學為其提供了思路，且其焦點集中于不斷優(yōu)化材料和其相關細胞因子的條件?；诖耍緦嶒瀲L試使用將PLGA和自組裝肽復合后制備多孔支架三維材料，同時結合前期研究的含TGFβ3基因質粒作為細胞刺激因子，從而觀察研究前軟骨干細胞在此復合支架中的向軟骨方向分化的能力。
　　【方法】免疫磁珠分選法分離培養(yǎng)FGFR-3陽性的前軟骨干細胞，將其種植于包被有多聚賴氨酸PLL的PLGA和自組裝肽的

2、復合支架中，并以NLS-TAT非病毒載體和編碼TGFβ3的質粒DNA作為細胞刺激因子裝載于復合材料中，且將不含質粒DNA和NLS-TAT的作為對照組。在體外培養(yǎng)4周后，分別提取與軟骨生成相關的基因如Sox9、Aggrecan、Collagen II的RNA，通過RT-PCR技術檢測相關基因的表達水平；同時提取復合體中的蛋白使用Western bloting測定TGFβ3的表達蛋白。復合體經(jīng)過固定后通過HE染色、免疫組織化學法等方法檢測細

3、胞的生長狀態(tài)和相關蛋白的表達情況。同時，PLGA、自組裝肽的相關材料的毒性和特性以及與細胞在其中生長狀況加以檢測和證實。
　　【結果】PLGA材料對于前軟骨干細胞無明顯的毒性，且細胞可以很好地黏附生長于多聚賴氨酸包被的PLGA和自組裝肽凝膠狀中。在實驗組中Sox9、Aggrecan、Collagen II基因表達水平隨著培養(yǎng)時間的延長有不同程度的升高，TGFβ3的蛋白表達也依次增強。免疫組化染色的結果示實驗組較對照組有較多Coll