TNFα拮抗劑治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物遺傳學(xué)研究.pdf

1、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為病理基礎(chǔ)的自身免疫病。該病發(fā)病率高，致殘性強(qiáng)，危害大。RA患病率國(guó)外1-2％，國(guó)內(nèi)為0.32-0.36％，我國(guó)約有500萬(wàn)患者，病程5-10年致殘率為60％，晚期90％患者喪失社會(huì)勞動(dòng)力和生活自理能力，它是目前致殘性最強(qiáng)的疾病之一。
　　 近年來(lái)的研究證實(shí)，腫瘤壞死因子α是類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病和維持關(guān)節(jié)慢性滑膜炎癥反應(yīng)的最重要的致炎性細(xì)胞因子

2、之一。TNF-α可作用于關(guān)節(jié)組織中的滑膜細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，使這些細(xì)胞活化并產(chǎn)生金屬蛋白酶、膠原酶、基膜溶解酶等，導(dǎo)致局部炎癥反應(yīng)和血管翳形成，進(jìn)一步引起軟骨破壞和骨侵蝕。因此，抑制TNF-α作用的生物制劑可有效改善RA病情，這一發(fā)現(xiàn)成為近年來(lái)RA治療的新里程碑。但是并非所有患者都有效，有30-40％的患者使用后沒(méi)有明顯療效，這些患者對(duì)TNFα拮抗劑沒(méi)有反應(yīng)的原因至今不明。
　　 本研究隨機(jī)選取經(jīng)TNFα拮抗劑治

3、療的RA患者，療程6個(gè)月，運(yùn)用國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)(ACR標(biāo)準(zhǔn)和DAS28)評(píng)估療效；采用序列特異性引物擴(kuò)增法分別檢測(cè)TNF基因和TRAF1-C5基因11個(gè)SNP位點(diǎn)的多態(tài)性；利用藥物遺傳學(xué)基本原理，分別和聯(lián)合評(píng)價(jià)兩種基因多態(tài)性與療效的關(guān)系。以期建立預(yù)測(cè)TNFα拮抗劑療效和不良反應(yīng)的遺傳和生化標(biāo)記，指導(dǎo)RA合理用藥，提高規(guī)范化和個(gè)體化治療水平，減少費(fèi)用。
　　 第一部分 TNFα拮抗劑治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎療效分析
　　 目的：分析

4、TNF-α抑制劑治療RA患者的療效和安全性，并為進(jìn)一步研究TNFα抑制劑治療RA的藥物基因組學(xué)(包括相關(guān)基因與RA的易感相關(guān)性、預(yù)測(cè)RA的病情輕重、以及預(yù)測(cè)個(gè)體使用TNF-α拮抗劑治療RA的療效等)篩選樣本。
　　 方法：100例接受穩(wěn)定劑量MTX或來(lái)氟米特至少已4周的RA患者參加本研究。RA患者按接受治療方法分為：?jiǎn)斡肕TX組，單用TNFα拮抗劑組和聯(lián)合使用MTX/來(lái)氟米特及TNFα拮抗劑組。在治療第0、4、8、12、24周進(jìn)

5、行臨床病情評(píng)估、實(shí)驗(yàn)室檢查、影象學(xué)檢查及不良事件觀察等。
　　 結(jié)果：在治療第24周時(shí)，單用MTX組達(dá)到美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(ACR20，ACR50，ACR70，ACR90)的患者的比例分別為50.0％，18.8％，6.3％和0％；單用TNFα拮抗劑組ACR比例分別為83.3％，58.3％，25.0％和8.3％；聯(lián)合使用MTX/來(lái)氟米特及TNFα拮抗劑組ACR比例分別為86.1％，70.8％，31.9％和6.9％。達(dá)到AC

6、R20、ACR50的患者比例在三組間有顯著性差異(P＜0.05)。各組DAS28評(píng)分比基線期下降分別為：1.30±0.25，2.64±0.26，2.83±0.16，TNFα拮抗劑組和聯(lián)合用藥組均比MTX組明顯下降，P值分別＜0.05和0.001，TNFα拮抗劑組和聯(lián)合用藥組兩組間無(wú)顯著性差異，P值＞0.05。
　　 結(jié)論：?jiǎn)斡肨NFα拮抗劑或聯(lián)合使用MTX/來(lái)氟米特及TNFα拮抗劑比單用MTX治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具有較好的療效。

7、r>　　 第二部分 TNF基因、TRAF基因與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性的研究
　　 第一節(jié) TRAF1基因多態(tài)性與中國(guó)漢族類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者疾病易感相關(guān)性
　　 目的：在漢族人群中對(duì)已有報(bào)道的與白種人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)易感相關(guān)的TRAF1基因的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，分析其與漢族人群RA的易感相關(guān)性。
　　 方法：采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜方法對(duì)漢族類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者(RA組，n=100)和健康人(對(duì)照組，n

8、=100)TRAF1基因的6個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行了基因分型，并使用Haploview軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：在中國(guó)漢族RA患者中位于TRAF1基因的六個(gè)位點(diǎn)中，rs4836834位點(diǎn)與健康對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)，其他五個(gè)位點(diǎn)，包括已有報(bào)道與白種人RA易感相關(guān)的rs10818488位點(diǎn)，RA組與健康對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。而連鎖不平衡及單倍體型頻率分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs7021049與rs7021880

9、，rs7021049與rs4836834，rs7021880與rs4836834之間存在較強(qiáng)的連鎖不平衡，三組連鎖不平衡關(guān)系單倍體頻率RA組與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：TRAF1可能是漢族人RA的易感基因，但其單核苷酸多態(tài)性與白種人的表現(xiàn)有所不同。
　　 第二節(jié) TNF基因、TRAF基因多態(tài)性與TNFα拮抗劑治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎療效相關(guān)性
　　 目的：檢測(cè)TNF基因和TRAF1基因11個(gè)SNP位點(diǎn)，分別和聯(lián)

10、合評(píng)價(jià)兩種基因多態(tài)性與TNFα拮抗劑治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎療效的關(guān)系。
　　 方法：將84例使用TNFα拮抗劑治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者按治療24周后療效是否達(dá)到ACR20分為無(wú)效組(15例)和有效組(69例)，使用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜方法對(duì)其TNF基因和TRAF1基因的11個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，使用Haploview軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：11個(gè)位點(diǎn)中，TNF基因的rs1800629位點(diǎn)無(wú)效組的GG基因型頻率顯