P2X-,3-受體介導(dǎo)外周傷害性刺激引起疼痛作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：P2X<,3>受體是一種新型疼痛受體。已有研究表明，P2X<,3>受體在感覺神經(jīng)元中表達(dá)，它可能在調(diào)節(jié)疼痛信息的傳遞上發(fā)揮作用。本研究采用足底注射P2X<,3>受體激動(dòng)劑，建立大鼠疼痛模型，觀察大鼠的傷害性反應(yīng)，并采用免疫組化的方法，測(cè)定大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)上的P2X<,3>受體，以及相應(yīng)脊髓節(jié)段背角上的P物質(zhì)受體NK<,1>和谷氨酸受體NDMR<,1>的表達(dá)。并于椎管內(nèi)注射P物質(zhì)和谷氨酸受體拮抗劑，進(jìn)一步觀察動(dòng)物行為學(xué)變化及

2、脊髓背角NK<,1>和NDMR<,1>的表達(dá)。旨在探討P2X<,3>受體在介導(dǎo)外周傷害刺激引起疼痛的作用機(jī)制。 方法： 1.健康成年雄性SD大鼠30只，體重250-300g隨機(jī)分為5組，每組6只(n=6)。A組：正常對(duì)照組(左后足底注射生理鹽水100μl)；B組：左后足底注射P2X3受體激動(dòng)劑ATP(1μmol/L)100ul；C組：左后足底注射P2X3受體強(qiáng)效激動(dòng)劑α、β-meATP(0.6μmol/L) 100μl；

3、D組：左后足底注射P2X3受體強(qiáng)效激動(dòng)劑和P2X3受體特異性拮抗齊α、β-meATP (0.6μmol/L ) 100μl+TNP-ATP(0.3μmol/L)100μl; E組：左后足底注射P2X3受體激動(dòng)劑和P2X3受體拮抗劑 ATP(1μumol/L)100μl+TNP-ATP(0.3μmoL/) 100Bμl。觀察縮腳次數(shù)，每5分鐘作為一個(gè)觀察單位，持續(xù)觀察一個(gè)小時(shí)。分離大鼠DRG。采用免疫組化的方法分別測(cè)定每組DRG上P2X<

4、,3>受體的表達(dá)及相應(yīng)節(jié)段脊髓背角上的NK1和NDMR1的表達(dá)。 2.成年SD雄性大鼠30只，隨機(jī)分為5組，每組6只(n=6)。A組：正常對(duì)照組，大鼠椎管注射生理鹽水50μl；B 組：椎管注射P2X<,3>受體拮抗劑TNP-ATP(0.3μmol/L) 100μl；C組：椎管注射谷氨酸受體拮抗劑(L-701，3142)5μg；D組：椎管注射P物質(zhì)拮抗劑(S3144)，8μg，E組：椎管注射(L-701，3142+S3144)8

5、μg+5μg。所有組別均在椎管注射后左后足底注射P2X<,3>受體強(qiáng)效激動(dòng)劑a、βme-ATP(0.6μmol/L)100μl，及椎管內(nèi)注射0.1％二甲基亞楓10μl，動(dòng)物行為學(xué)觀察方法同前，取其相應(yīng)節(jié)段的脊髓，采用免疫組化法分別測(cè)定各組相應(yīng)節(jié)段脊髓背角神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞上的NK1和NDMR1的表達(dá)。 結(jié)論： 1.P2X<,3>受體主要表達(dá)在DRG上的中小神經(jīng)元上。 2.大鼠疼痛是由P2X3受體介導(dǎo)，并和脊髓