PC-1特異性區(qū)段分析與功能研究及紅麻油脂CLA抗癌功能初步探討.pdf

1、PC—1基因定位于前列腺癌最常發(fā)生擴(kuò)增的染色體8q21．1基因座，是周建光研究員發(fā)現(xiàn)并克隆的前列腺癌相關(guān)基因，其產(chǎn)物屬于TPD52蛋白家族，N端46個(gè)氨基酸是其所特有。PC—1是一個(gè)雄激素應(yīng)答基因，在AR(androgen，receptor)陽(yáng)性與陰性的前列腺癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，并隨著臨床分級(jí)和細(xì)胞惡性程度的增加而表達(dá)升高。前期研究表明，PC—1具有轉(zhuǎn)錄因子的特征并能促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和雄激素非依賴的生長(zhǎng)。紅麻油脂是以亞油酸為主要成

2、分的、安全的使用油脂，經(jīng)精煉、催化后其主要成分可轉(zhuǎn)變?yōu)镃LA。CLA在動(dòng)物和植物界中廣泛存在，是必需脂肪酸亞油酸酸9，12—18：2(LA)衍生的共軛雙烯酸，對(duì)人的生理功能具有重要意義。國(guó)內(nèi)外大量的研究表明，CLA對(duì)多種腫瘤具有明顯的抑制作用。鑒于此，我們運(yùn)用了一系列實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)PC—1的特異性片段和紅麻油脂CLA的抗癌功能進(jìn)行研究，并取得以下結(jié)果：
　　 1、通過(guò)重疊PCR等分子克隆技術(shù)構(gòu)建不同的融合綠色熒光蛋白的PC—1截短

3、體、突變體的pEGFP載體，讓其在前列腺癌細(xì)胞系LNCaP中表達(dá)，熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)，PC—1定位細(xì)胞質(zhì)的大小極限應(yīng)該在111～114個(gè)氨基酸殘基左右，同時(shí)PC—1分子的103～114位氨基酸對(duì)其亞細(xì)胞定位十分重要，但不是出核序列。
　　 2、運(yùn)用同源重組技術(shù)，經(jīng)過(guò)穿梭載體構(gòu)建、酶切線性化、體外細(xì)菌重組等步驟構(gòu)建了pAd—EGFP，pAd—EGFP—PC11—46、pAd—EGFP—PC—147—224、pAd—EGFP—PC—1

4、等重組腺病毒載體，為研究PC—1片段功能提供了先決條件。
　　 3、平板克隆和westerblot實(shí)驗(yàn)證明，CLA在體外具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，并且能夠降低前列腺癌細(xì)胞C4—2中的AKT磷酸化水平。
　　 本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了對(duì)PC—1亞細(xì)胞定位有重要影響的氨基酸序列和成功的構(gòu)建了用于PC—1片段功能研究的腺病毒載體，為今后PC—1的研究積累基礎(chǔ)。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)紅麻油脂CLA在體外抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，提示其在藥用或保