基于Hep G2細胞膜表面HSP70的免疫應用研究.pdf

1、博士學位論文基于HepG2細胞膜表面HSP70的免疫應用研究ImmunologicalApplicationResearchBasedonHeatShockProtein70ontheSurfaceofHepG2Cells作者學科、，當_r姓名：專業(yè)：Izl丐：指導教師：儉丞堊塾援完成日期：至Q!墨生墨旦大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理]：大學博士學位論文摘要抗腫瘤藥物對機體正常細胞的細胞毒性及

2、腫瘤細胞多藥耐藥性機制始終是抗腫瘤治療的主要障礙。抗腫瘤靶向藥物雖然有較低的細胞毒性和可選擇性殺傷腫瘤細胞的作用，但多數(shù)靶向藥物通?；谀[瘤細胞與正常細胞間差異性抗原研制，故在腫瘤細胞發(fā)生抗原漂移和抗原調變時常使抗腫瘤靶向藥物的療效減弱，甚至失去療效。在探索抗腫瘤治療途徑過程中，人們發(fā)現(xiàn)熱療法可在不傷害機體正常細胞的情況下選擇性殺傷腫瘤細胞，而且還可通過熱誘導作用使腫瘤細胞的免疫原性增強，從而有助于機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的識別，進而增強

3、機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的殺傷作用。然而，單純依靠熱療方法進行抗腫瘤治療，存在療效低、治療不徹底等缺點，因此熱療法通常與其它抗腫瘤治療方法聯(lián)合使用。熱休克蛋白(HeatShockProteins，HSPs)是高度保守的細胞蛋白質家族之一，腫瘤熱療、化療等因素都可誘導產生熱休克蛋白。HSPs可通過多肽結合閡與腫瘤細胞內不同的腫瘤相關抗原結合形成復合物并激活免疫系統(tǒng)。有研究表明，腫瘤細胞內HSPs水平顯著高于正常組織細胞；在腫瘤細胞膜表面可檢

4、測到HSPs，而相同條件下正常細胞膜表面卻檢測不到HSPs。但是，腫瘤細胞經熱誘導后細胞膜表面蛋白水平是否存在規(guī)律性變化以及能否用于抗腫瘤治療鮮見報道。為此，本研究首先考察經熱誘導后人肝癌HepG2細胞膜表面蛋白水平是否存在規(guī)律性變化。由于HSP70是腫瘤細胞膜表面的主要熱誘導蛋白，故先采用流式細胞術等方法對熱誘導后HepG2細胞膜表面HSP70水平的動態(tài)變化情況進行研究。在此基礎上，采用經熱誘導的HepG2細胞免疫BALB／c小鼠，通

5、過免疫學和基因工程的方法構建單鏈抗體文庫，然后利用核糖體展示和免疫親和篩選方法，獲得與熱誘導后HepG2細胞結合的特異性單鏈抗體，進而構建特異性單鏈抗體重組免疫毒素基因并對其表達的融合蛋白特異性、親和性以及抗腫瘤活性進行檢測。研究顯示HepG2細胞膜表面HSP70水平在42℃熱誘導后37℃恢復培養(yǎng)12h出現(xiàn)峰值，同時細胞膜表面可檢測到HSP70的細胞百分數(shù)顯著增加(由785％增加到1511％)。采用核糖體展示技術成功篩選獲得與熱誘導后H