As-,2-O-,3-下調(diào)MG-63骨肉瘤細(xì)胞IEX-1基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：As2O3是中國傳統(tǒng)中藥砒霜的主要有效成分，最早應(yīng)用于血液系統(tǒng)腫瘤的治療，隨后研究表明其對(duì)實(shí)體瘤也具有抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的作用。本研究小組早期研究發(fā)現(xiàn)，1.0μmol/L的As2O3可以體外誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞系MG-63細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步的cDNAArray，RT-PCR，Northern Blot證實(shí)細(xì)胞凋亡與As2O3干預(yù)后IEX-1基因表達(dá)下調(diào)有關(guān)。本研究擬深入探討As2O3干預(yù)MG-63細(xì)胞下調(diào)IEX-1基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制

2、。 方法：采用PCR方法從外周血gDNA中擴(kuò)增出IEX-1基因的啟動(dòng)子及調(diào)控序列，連入螢光素酶報(bào)告基因載體，通過雙螢光素酶分析As2O3干預(yù)對(duì)IEX-1基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響；[γ-32P]ATP末端標(biāo)記EMSA分析IEX-1啟動(dòng)子順式作用元件與p53結(jié)合；Western Blot檢測(cè)As2O3干預(yù)后p53及IEX-1蛋白表達(dá)水平的改變。 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)As2O3干預(yù)骨肉瘤細(xì)胞系MG-63后能誘導(dǎo)p53蛋白表達(dá)上調(diào)，增加的