梨果采后病害新型拮抗菌分離、篩選及安全性研究.pdf

1、水果在采摘、運銷、以及儲藏過程中因腐爛造成的損失是巨大的，也是全球關注的問題。在發(fā)達國家有10％-30％的新鮮產品由于采后病害導致腐爛，而在缺乏貯運冷鏈設備的發(fā)展中國家，果實采后腐爛率則高達40％-50％。
　　 目前，最常用的有效控制水果腐爛的方法是低溫和化學殺菌劑處理。近年來雖然冷藏技術在我國得到了廣泛的發(fā)展，但是在低溫貯藏情況下，仍有相當數(shù)量的病原菌可以在水果上面生長，從而引起腐爛?；瘜W殺菌劑處理，雖然效果顯著，但是在殺死

2、病原菌的同時也殺死了有益微生物，且藥物殘留對人體健康和環(huán)境的危害很大?；瘜W農藥對環(huán)境的污染和由此帶來的食品安全問題已成為當今世界各國關注的熱點，用生物拮抗菌控制水果采后病害是替代或減少化學藥劑使用的有效途徑和發(fā)展方向。
　　 本研究從多種途徑分離篩選拮抗菌并確定其生物學分類地位，篩選到生防效果性能優(yōu)良的菌種。研究了生物防治拮抗菌株的生物安全性，并對生防拮抗菌商品化制劑的生產工藝和保藏方法進行了初步的探討。得到了如下的結論：

3、>　　 (1)通過體外試驗和活體試驗篩選，酵母菌Y20和Y21，對梨果灰霉病菌(Botrytiscinerea)、桃果青霉病菌(Penicilliumexpansum)兩種病原菌表現(xiàn)出較好的抑菌效果。對Y20和Y21二株菌株進行形態(tài)特征、營養(yǎng)特征和生理特性試驗以及DNA分子序列測定，鑒定Y20為膠紅酵母（Rhodotorulamucilaginosa），Y21為接合酵母（Zygoascushellenicus）。目前，尚未見到Y20和

4、Y21兩種酵母菌在采后病害生物防治應用中的報道。
　　 (2)酵母菌Y20和Y21兩株菌株的生長速度很快，沒有明顯的遲滯期。Y20和Y21兩種拮抗酵母菌都能顯著地抑制梨果的灰霉病和青霉病，在1×107CFU/Ml、1×108CFU/Ml和1×109CFU/Ml的濃度下都能顯著降低梨果的腐爛率，且酵母濃度越高效果越好。拮抗酵母在1×108CFU/Ml濃度下對梨果灰霉病和青霉病具有穩(wěn)定的生防效果。拮抗酵母Y20、Y21(濃度1×10

5、8CFU/Ml)處理的梨果，在常溫下(20℃)放置45d后，梨果實的發(fā)病率顯著低于對照組，并且不會對梨果的貯藏品質造成不良的影響。
　　 (3)急性經(jīng)口毒性試驗研究表明，膠紅酵母Y20和接合酵母Y21經(jīng)口急性毒性的MTD>21.5g/kg，根據(jù)GB15193.3-2003附錄急性毒性劑量分級表的規(guī)定，均屬無毒級。Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗等遺傳毒性試驗表明，膠紅酵母Y20和接合酵母Y21對小鼠無

6、致畸、致突變作用。在30d喂養(yǎng)試驗中，沒有發(fā)現(xiàn)拮抗酵母對小鼠生長，血液常規(guī)指標、理化指標、生理功能以及主要器官組織（肝臟、脾臟、腎臟等）產生不良影響。
　　 (4)用廉價的糖蜜為原料對Y20進行培養(yǎng)基的優(yōu)化，均勻試驗的結果表明以最優(yōu)的培養(yǎng)基組合：糖蜜16.58％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.05％，尿素0.3％培養(yǎng)酵母，可以得到最大生物量1.402g/100mL。
　　 (5)對Y20和Y21的凍干保藏制劑的研究表明

7、，Y20和Y21在6個月內的活性可以保持在儲藏前的75.6％以上。兩株酵母凍干粉貯藏在4℃的條件下，可以在6個月內保持良好的生物活性。對Y20和Y21液體保藏制劑的研究表明，在室溫20℃、4℃保存條件下的Y20菌懸液保存效果最好組為：10％海藻糖、0.0176％Vc和PBS混合保存液體。在室溫20℃、4℃保存條件下的Y21菌懸液保存效果最好組為：5％海藻糖、0.0176％Vc和PBS混合保存液體。
　　 (6)Y20和Y21保藏

8、期內對梨果腐爛發(fā)病率的研究結果表明，無論采用凍干保藏還是液體保藏的菌體制劑，對于梨果的病害仍然具有良好的生防效果。
　　 綜上所述，拮抗酵母Y20和Y21作為梨果采后病害生物防治拮抗菌，為梨果采后病害生物防治提供了兩株生防性能優(yōu)良的菌株。通過對拮抗酵母Y20和Y21生防效果研究、安全性研究、商品化工藝的研究表明兩株酵母的生物防治效果顯著，安全無毒，具備商品化應用的潛質，為拮抗酵母Y20和Y21在水果采后生物保鮮技術的研究、菌株安