ECMO延遲復(fù)蘇兔失血性休克顯著減輕肺損傷.pdf

1、研究背景和目的:失血性休克是一種臨床常見疾病,大多由創(chuàng)傷引起,是目前的主要死亡原因之一。休克的臨床治療主要是采用晶體和全血的方式進(jìn)行復(fù)蘇。但是當(dāng)遇到客觀條件(如:交通傷、汶川地震、戰(zhàn)爭(zhēng)等)限制時(shí),由于不能及時(shí)復(fù)蘇,很多失血性休克的患者并發(fā)嚴(yán)重的肺損傷,甚至呼吸衰竭或者多器官功能衰竭。并且隨著休克持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng),傳統(tǒng)的全血+晶體的液體復(fù)蘇方式對(duì)肺的保護(hù)效果差,甚至還會(huì)加重急性肺損傷,增加休克患者的死亡率。因此對(duì)失血性休克長(zhǎng)時(shí)間延遲復(fù)蘇肺保

2、護(hù)的研究仍是休克研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　目前有很多關(guān)于失血性休克炎癥反應(yīng)、復(fù)蘇方式、器官保護(hù)等方面的研究,但是他們的研究對(duì)象大多局限于休克持續(xù)時(shí)間較短(30-90分鐘)的動(dòng)物模型上。而在現(xiàn)實(shí)中有很多失血性休克患者休克持續(xù)時(shí)間超過90分鐘,甚至長(zhǎng)達(dá)3小時(shí)以上。在戰(zhàn)時(shí)因轉(zhuǎn)運(yùn)不便,這一休克持續(xù)時(shí)間還會(huì)更長(zhǎng)。這類患者復(fù)蘇成功率低,并且很容易并發(fā)嚴(yán)重的急性肺損傷,甚至發(fā)生呼吸衰竭。而目前臨床采用的呼吸機(jī)支持的肺通氣方式不僅院外使用不便,而且

3、還可能會(huì)損傷氣道,甚至加重肺損傷。
　　近年來ECMO技術(shù)作為一種新的有效的生命支持手段,在心肺衰竭等危急重癥領(lǐng)域的應(yīng)用中取得了一定的成績(jī)。隨著ECMO制作工藝的改進(jìn),ECMO使用過程中對(duì)凝血功能影響越來越小,甚至有學(xué)者提出在復(fù)雜生理?xiàng)l件下ECMO對(duì)出血患者的使用不是絕對(duì)禁忌。這極大地拓展ECMO在創(chuàng)傷患者的應(yīng)用前景。
　　因此,本研究采用兔股動(dòng)脈放血的方式建立失血性休克延遲3小時(shí)復(fù)蘇的動(dòng)物模型。并在傳統(tǒng)晶體+全血的液體復(fù)蘇

4、的基礎(chǔ)上引入ECMO技術(shù)對(duì)失血性休克持續(xù)3小時(shí)的兔進(jìn)行復(fù)蘇,并且進(jìn)一步探討ECMO減輕失血性休克延遲復(fù)蘇兔肺損傷的作用。
　　方法:
　　1.采用股動(dòng)脈放血至平均動(dòng)脈壓40mmHg,并維持平均動(dòng)脈壓(35-40) mmHg3小時(shí)建立失血性休克延遲復(fù)蘇的模型。然后把失血性休克延遲復(fù)蘇的實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為休克未復(fù)蘇組、液體復(fù)蘇組和ECMO復(fù)蘇組,每組8只,休克未復(fù)蘇組不進(jìn)行復(fù)蘇處理,液體復(fù)蘇組采用晶體+全血進(jìn)行復(fù)蘇,ECMO復(fù)蘇組在

5、晶體+全血復(fù)蘇的基礎(chǔ)上聯(lián)合ECMO進(jìn)行復(fù)蘇。復(fù)蘇2小時(shí)后觀察各組的血流動(dòng)力學(xué)恢復(fù)情況。待動(dòng)物安樂死后留取標(biāo)本進(jìn)行下一步檢測(cè);
　　2.檢測(cè)休克前、休克畢、復(fù)蘇畢動(dòng)脈血?dú)?比較各組氧分壓的變化;
　　3.行肺泡灌洗并對(duì)灌洗液進(jìn)行離心,取上清液進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)蛋白滲出量,比較各組肺通透性改變;
　　4.采用HE染色觀察各組肺組織病理改變;
　　5.采用電鏡掃描觀察各組肺組織II型肺泡上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化;

6、　　6.采用ELISA法檢測(cè)各組肺組織髓過氧化物酶(MPO)改變;
　　7.采用TUNEL(原位缺口末端標(biāo)記法)檢測(cè)各組肺組織細(xì)胞凋亡的改變;
　　8.采用Western blot法檢測(cè)半胱氨酸蛋白酶3的表達(dá)情況;
　　9.統(tǒng)計(jì)分析:采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。
　　結(jié)果:
　　1.成功建立了兔失血性休克延遲3小時(shí)復(fù)蘇的模型。
　　2.從復(fù)蘇畢血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)來

7、看:ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時(shí)后的平均動(dòng)脈壓較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯回升(p<0.05,p<0.01)。
　　3.從動(dòng)脈血氧分壓來看:ECMO復(fù)蘇組能夠明顯提高動(dòng)脈血氧分壓(p<0.05)。
　　4.從復(fù)蘇畢各組肺組織HE染色后光鏡下的觀察來看:ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時(shí)后肺組織的病理損傷較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減輕。
　　5.電鏡下觀察發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時(shí)后 II型肺泡上皮細(xì)胞的損傷較液體復(fù)蘇組和休

8、克未復(fù)蘇組明顯減輕,板層小體清晰。
　　6.采用ELISA檢測(cè)各組肺組織髓過氧化酶發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時(shí)后肺組織MPO的表達(dá)較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減少(p<0.05)。
　　7.復(fù)蘇畢考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)各組肺灌洗液蛋白濃度發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時(shí)后肺泡灌液的蛋白含量較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減少(p<0.05)。
　　8. TUNEL(原位缺口末端標(biāo)記法)法檢測(cè)各組肺組織細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇

9、組復(fù)蘇2小時(shí)后肺組織細(xì)胞凋亡較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減輕。
　　9.半胱氨酸蛋白酶3Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn):ECMO組半胱氨酸蛋白酶3的表達(dá)較休克未復(fù)蘇組和液體復(fù)蘇組明顯降低。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立了兔失血性休克延遲3小時(shí)復(fù)蘇的動(dòng)物模型。
　　2. ECMO聯(lián)合晶體+全血復(fù)蘇的方法有利于兔失血性休克延遲復(fù)蘇的血流動(dòng)力學(xué)的恢復(fù)和維持。
　　3. ECMO聯(lián)合晶體+全血復(fù)蘇的方法可以明顯