阿勒泰大尾羊FABP4、ADIPOQ和CFD基因分子克隆及其組織差異性表達的研究.pdf

1、目的：阿勒泰羊是一種脂臀型綿羊品種，其獨特的尾脂在維持機體正常的新陳代謝和體溫過程中扮演了重要的角色，主要通過尾部脂肪沉積與代謝消長規(guī)律來適應惡劣的環(huán)境以維持機體正常的新陳代謝和體溫，是研究綿羊尾脂沉積與代謝機制的理想模型。近年來的研究表明，F(xiàn)ABP4、ADIPOQ和 CFD基因參與葡萄糖和脂肪酸代謝以及脂肪細胞分化等生理過程，初步推測其與脂肪沉積代謝密切相關(guān)。本文以阿勒泰羊為研究對象，探討了 FABP4、ADIPOQ、CFD基因?qū)Π⒗?/p>

2、泰羊尾脂沉積與代謝的影響。
　　方法：
　　1、阿勒泰羊饑餓與非饑餓模型的構(gòu)建。模擬阿勒泰羊在自然生理狀態(tài)下尾脂沉積與代謝兩種極端狀態(tài)，即在夏秋季節(jié)牧草豐茂時脂肪沉積、春冬季節(jié)牧草匱乏時尾脂分解代謝的方式，對阿勒泰羊進行了饑餓試驗，構(gòu)建了阿勒泰羊饑餓與非饑餓狀態(tài)下尾脂沉積與代謝的動物模型。
　　2、以阿勒泰羊尾脂組織 cDNA為模板，通過 RT-PCR方法克隆獲得 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因完整的 CDS區(qū)

3、序列。
　　3、以阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、腸系膜脂肪、尾脂等主要組織 cDNA為模板，采用半定量 RT-PCR方法獲得 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因在阿勒泰羊不同組織中的表達譜。
　　4、應用實時熒光定量 PCR技術(shù)檢測了 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因在阿勒泰羊饑餓與非饑餓模型尾脂組織中的表達變化情況。
　　結(jié)果：
　　1、通過2周逐步限飼和4周完全禁食（期間自由飲水）后，

4、饑餓模型阿勒泰羊精神上表現(xiàn)出焦躁不安、采食欲望強烈；其臀尾表現(xiàn)出“癟瘦”表型，臀尾部皮膚松弛、軟塌，臀部尾脂體積減小了1/3以上；體重顯著下降；尾脂脂肪細胞體積變小，呈扁平的梭形。
　　2、克隆得到綿羊 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因完整的 CDS序列，分別編碼132、239、261個氨基酸。綿羊 FABP4核苷酸序列及氨基酸序列與山羊、牛、牦牛、馬鹿等反芻動物對應序列的同源性均高達90％以上；綿羊 ADIPOQ基因的核苷

5、酸序列與牛、小鼠、大鼠、野豬、人等對應序列的同源性在75%以上，其中與牛對應序列的同源性高達85%以上；綿羊 CFD基因核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列與反芻動物牛的同源性均高達96.9%以上。
　　3、半定量 RT-PCR檢測結(jié)果表明，F(xiàn)ABP4基因在阿勒泰羊心臟、肺臟、肌肉、腸系膜脂肪、尾脂組織中均有表達，但在腸系膜脂肪和尾脂中高豐度表達；ADIPOQ基因在尾脂組織中特異性高表達；CFD基因在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉、尾脂中

6、均表達，但在尾脂中高豐度表達。
　　4、實時熒光定量 PCR結(jié)果表明，阿勒泰羊 FABP4基因在非饑餓組尾脂中的表達量略高于饑餓組尾脂，但二者差異不顯著；ADIPOQ、CFD基因則結(jié)果相反，阿勒泰羊 ADIPOQ和CFD基因在饑餓組尾脂中的表達量顯著高于在饑餓組尾脂中的表達。
　　結(jié)論：上述結(jié)果表明，F(xiàn)ABP4、ADIPOQ、CFD基因在阿勒泰羊尾脂沉積與代謝過程中具有一定的調(diào)控作用，可以作為哺乳動物脂肪組織發(fā)育調(diào)控過程中重