鴨MyoD1和Myf5基因CDS區(qū)克隆及其在肌肉組織中發(fā)育差異性表達(dá)研究.pdf

1、MRFs家族成員包括MyoD1、MyoG(Myogenin)、Myf5和MRF4(Myf6，herculian)，它們調(diào)控從前體肌細(xì)胞的定型、增殖以及肌纖維的形成，直到個(gè)體出生后肌肉的成熟和功能的完善等肌肉發(fā)生發(fā)育的各個(gè)環(huán)節(jié)，其中MyoD1主要實(shí)現(xiàn)對(duì)軀干肌肉成肌細(xì)胞的早期決定，而Myf5則實(shí)現(xiàn)對(duì)四肢肌肉成肌細(xì)胞的早期決定。本研究通過分子克隆得到鴨MyoD1和Myf5CDS序列，并采用熒光定量PCR的方法檢測MyoD1和Myf5在胚胎形成

2、后肌肉的發(fā)育過程中的表達(dá)變化情況，研究其在鴨胚胎形成后骨骼肌、平滑肌和心肌中的作用，以期豐富對(duì)MyoD1和Myf5基因在肌肉發(fā)育中作用的認(rèn)識(shí)，結(jié)果表明：
　　 1.克隆得到鴨MyoD1和Myf5基因CDS序列長度分別為894bp和768bp，分別編碼297和255個(gè)氨基酸，MyoD1和Myf5基因的核苷酸、氨基酸序列與其他物種均具有較高相似性。將鴨MyoD1和Myf5基因cDNACDS全序列提交到GenBank，登錄號(hào)分別是：F

3、J374143，F(xiàn)J938240。
　　 2.鴨MyoD1和Myf5基因均包含bHLH結(jié)構(gòu)域，該區(qū)域與雞的氨基酸序列完全相同，與人相比分別存在2個(gè)和1個(gè)變異位點(diǎn)；與斑馬魚相比變異位點(diǎn)相對(duì)較多，分別達(dá)到2個(gè)和6個(gè)。
　　 3.對(duì)鴨MyoD1和Myf5基因的bHLH結(jié)構(gòu)域進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)有4個(gè)變異位點(diǎn)。兩基因在氨基酸C端和N端的二級(jí)結(jié)構(gòu)分布略有差異，但均由α-螺旋、延伸片段和無規(guī)卷曲組成；兩基因CDS區(qū)均存在Ser、Thr和T

4、yr三種磷酸化位點(diǎn)，但總數(shù)有所不同，且主要分布在氨基酸C端和N端。
　　 4.MyoD1和Myf5基因在鴨胚10d、14d、18d、22d、27d和出殼后7d的胸肌、腿肌組織中均有不同程度的表達(dá)。在胸肌中，MyoD1達(dá)到高峰的時(shí)間為胚胎18日齡，Myf5的表達(dá)高峰的時(shí)間為胚胎27日齡。在腿肌中，MyoD1與Myf5基因達(dá)到高峰的時(shí)間一致，均在胚胎14日齡，但是此后表達(dá)模式出現(xiàn)差異，MyoD1的表達(dá)驟然降低，然后維持到胚胎7日齡，