P450藥酶代謝體系中納米金的分離表征及其對2D6活性的影響.pdf

1、隨著納米技術(shù)的發(fā)展，金納米粒子被越來越多的應(yīng)用到生物傳感及醫(yī)藥領(lǐng)域中，在推動社會發(fā)展的同時暴露于人體及環(huán)境中的機率也隨之增大，因此納米金的安全性已成為一個現(xiàn)實性問題。位于肝臟的細胞色素P450酶系在催化藥物生物轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此將兩者結(jié)合運用體外代謝體系研究金納米粒子與細胞色素P450酶的相互作用對于探討納米金的安全性問題具有一定的生物學(xué)意義。有機相-水相均相體系是生物學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的體系，為了達到更加快速直接的分析

2、有機物質(zhì)(大部分被分析物的屬性)，減少基質(zhì)效應(yīng)等目的，在儀器分析前納米金的前處理必不可少。另一方面在目前為止毛細管電泳由于其獨特的優(yōu)勢，是分析生物大分子及分離納米粒子最為常用并且有效的分析手段?；谏鲜鲈?，本文在無機鹽誘導(dǎo)乙腈-水分相的基礎(chǔ)上建立了一種相轉(zhuǎn)移快速分離納米金的生物樣品簡易凈化方法；在上述前處理的基礎(chǔ)上初步考察了納米金對細胞色素P4502D6活性影響的濃度效應(yīng)和尺寸效應(yīng)；考察了毛細管電泳技術(shù)在細胞色素P450酶系和納米金分

3、離中的應(yīng)用，為探討二者相互作用機理提供一種方法學(xué)嘗試。
　　 本論文的主要工作如下：
　　 1、在無機鹽誘導(dǎo)乙腈/水均相體系分相的基礎(chǔ)上，建立了一種相轉(zhuǎn)移快速分離納米金膠體的生物樣品簡易凈化方法?？疾炝寺然c，氯化鎂，硫酸鎂，硫酸鈉四種無機鹽對小(5nm)，中(50nm)，大(100nm)三種尺寸納米金膠體的聚沉程度影響；考察了孵育時間對無機鹽誘導(dǎo)膠體金聚沉效果的影響；考察了無機鹽加入量對此前處理效果影響；應(yīng)用透射電子顯

4、微鏡(TEM)及紫外-可見吸收光譜儀觀察聚沉前后納米金膠體的形貌變化。最后將該前處理方法應(yīng)用于血清、肝藥酶復(fù)雜生物體系中右美沙芬及其代謝產(chǎn)物去甲右美沙芬的定量測定，取得了令人滿意的結(jié)果。
　　 2、在上述方法的基礎(chǔ)上，以右美沙芬為特異性底物，考察了5、7、10、20、50、100nm不同尺寸納米金膠體在不同濃度下對細胞色素P4502D6酶活性影響。通過IC50測定試驗，發(fā)現(xiàn)納米金對細胞色素P4502D6酶活性的影響呈現(xiàn)濃度依賴性