白念珠菌和釀酒酵母菌與TOR信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的基因功能鑒定.pdf

1、蛋白激酶TOR(Target of Rapamycin)的功能在真核細(xì)胞內(nèi)是非常保守的。釀酒酵母細(xì)胞中TOR由TOR1和TOR2兩個(gè)基因編碼，以兩種不同的復(fù)合物形式存在——TORC1(TOR complex1)和TORC2(TOR complex2)。白念珠菌基因組中只存在一個(gè)編碼TOR的基因。我們發(fā)現(xiàn)白念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫(kù)CGD(http：//www.candidagenome.org/)中給出的CaTOR1基因的ORF序列中存在兩個(gè)斷

2、裂的部分。我們分別對(duì)斷裂的部分進(jìn)行了克隆并測(cè)序，獲得了完整的CaTOR1基因序列。我們采用URA-blaster敲除盒同源重組的方法成功得到白念珠菌CaTOR1單等位基因缺失菌株，但是卻不能獲得其雙缺失菌株，表明CaTOR1基因可能是一個(gè)必需基因。CaTOR1單等位基因缺失菌株和背景菌株RM1000相比，表現(xiàn)出對(duì)雷帕霉素的敏感，但是對(duì)Li+、Na+、K+和Ca2+鹽離子不表現(xiàn)敏感性。在4mM的H2O2氧化脅迫、高溫(40℃)、CFW和C

3、ongo red存在的條件下，CaTOR1單等位基因缺失菌株和背景菌株RM1000相比無(wú)生長(zhǎng)差異。在含有不同碳源的YPD、YPE和YPG平板上與RM1000也無(wú)生長(zhǎng)差別。此外，白念珠菌中CaTOR1單等位基因缺失不影響細(xì)胞在菌絲誘導(dǎo)條件下(如SLAD、Spider和YPD+serum)形成菌絲的能力。
　　 我們首次發(fā)現(xiàn)缺失編碼TORC1組分之一的釀酒酵母ScTCO89基因的細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)Li+和Na+離子的敏感性，這與報(bào)道的Sc

4、TOR1基因的缺失引起Li+和Na+離子的敏感性的研究結(jié)果相互支持，因?yàn)榫幋aLi+和Na+鹽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的ENA1基因受TOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)控。
　　 我們還發(fā)現(xiàn)缺失編碼PP2C磷酸酯酶的釀酒酵母基因PTC1或PTC6的細(xì)胞均表現(xiàn)出對(duì)雷帕霉素的敏感性。在ptc6酵母細(xì)胞中引入含有PTC6基因的單拷貝pRS316-YCR079w質(zhì)?？梢曰謴?fù)ptc6酵母細(xì)胞的雷帕霉素耐受性，引入含有PTC6基因的多拷貝pRS426-YCR079w