白念珠菌和釀酒酵母菌與TOR信號傳導相關的基因功能鑒定.pdf

1、蛋白激酶TOR(Target of Rapamycin)的功能在真核細胞內(nèi)是非常保守的。釀酒酵母細胞中TOR由TOR1和TOR2兩個基因編碼，以兩種不同的復合物形式存在——TORC1(TOR complex1)和TORC2(TOR complex2)。白念珠菌基因組中只存在一個編碼TOR的基因。我們發(fā)現(xiàn)白念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫CGD(http：//www.candidagenome.org/)中給出的CaTOR1基因的ORF序列中存在兩個斷

2、裂的部分。我們分別對斷裂的部分進行了克隆并測序，獲得了完整的CaTOR1基因序列。我們采用URA-blaster敲除盒同源重組的方法成功得到白念珠菌CaTOR1單等位基因缺失菌株，但是卻不能獲得其雙缺失菌株，表明CaTOR1基因可能是一個必需基因。CaTOR1單等位基因缺失菌株和背景菌株RM1000相比，表現(xiàn)出對雷帕霉素的敏感，但是對Li+、Na+、K+和Ca2+鹽離子不表現(xiàn)敏感性。在4mM的H2O2氧化脅迫、高溫(40℃)、CFW和C

3、ongo red存在的條件下，CaTOR1單等位基因缺失菌株和背景菌株RM1000相比無生長差異。在含有不同碳源的YPD、YPE和YPG平板上與RM1000也無生長差別。此外，白念珠菌中CaTOR1單等位基因缺失不影響細胞在菌絲誘導條件下(如SLAD、Spider和YPD+serum)形成菌絲的能力。
　　 我們首次發(fā)現(xiàn)缺失編碼TORC1組分之一的釀酒酵母ScTCO89基因的細胞表現(xiàn)出對Li+和Na+離子的敏感性，這與報道的Sc

4、TOR1基因的缺失引起Li+和Na+離子的敏感性的研究結果相互支持，因為編碼Li+和Na+鹽離子轉運蛋白的ENA1基因受TOR信號轉導途徑的調(diào)控。
　　 我們還發(fā)現(xiàn)缺失編碼PP2C磷酸酯酶的釀酒酵母基因PTC1或PTC6的細胞均表現(xiàn)出對雷帕霉素的敏感性。在ptc6酵母細胞中引入含有PTC6基因的單拷貝pRS316-YCR079w質(zhì)?？梢曰謴蚿tc6酵母細胞的雷帕霉素耐受性，引入含有PTC6基因的多拷貝pRS426-YCR079w