白念珠菌IPF14030基因敲除菌和高表達菌的構(gòu)建及功能研究.pdf

1、白念珠菌是一種重要的人類條件致病菌。在系統(tǒng)性真菌感染病例中，白念珠菌感染占70％～80％，其死亡率高達30％～50％，而近十年來，臨床上耐藥菌株不斷增加，是臨床上真菌感染治療失敗的主要因為。本文意在從基因水平上尋找新的多藥耐藥相關(guān)基因，為新一代抗真菌化合物提供靶標，以克服真菌耐藥性。將未用藥物誘導的DSY1024與氟康唑和氟奮乃靜聯(lián)合誘導一個月后的DSY1024(產(chǎn)生高度耐藥表型)進行表達譜芯片雜交，分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)IPF14030基因的m

2、RNA表達顯著增高，這提示：IPF14030基因可能與白念珠菌產(chǎn)生耐藥性相關(guān)。
　　 為了探明IPF14030在白念珠菌耐藥產(chǎn)生過程中發(fā)揮的作用，本文利用基因表達水平不同的菌株研究了IPF14030基因的功能。首先，采用Ura-B1aster基因敲除策略構(gòu)建了IPF14030基因缺失菌；并采用PCR方法和southern雜交方法確證了IPF14030基因敲除成功；其次，用含有強啟動子MET3的白念珠菌高表達載體pCaEXP構(gòu)建了

3、IPF14030基因高表達菌，并用Real-time熒光實時定量PCR驗證了IPF14030基因表達增高；最后，利用IPF14030基因敲除菌、親本菌、IPF14030基因高表達菌，從不同的基因表達水平考察了IPF14030基因?qū)ιL曲線、藥物敏感性、菌絲形成和細胞內(nèi)ATP含量的影響。
　　 研究結(jié)果顯示：IPF14030基因?qū)Π啄钪榫L曲線，益康唑、伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、活力康唑及特比奈芬的藥物敏感性、菌絲形成無顯著影響