ROCK抑制劑在角膜緣干細胞體外擴增和保存中的作用研究.pdf

1、第一部分ROCK抑制劑在角膜保存中的作用研究
　　 目的：
　　 通過在角膜中期保存液中添加ROCK抑制劑Y-27632,觀察其對保存角膜上皮細胞活性率、角膜緣干細胞增殖能力、角膜內皮細胞活性的影響。
　　 方法：
　　 新鮮兔角膜15只,4℃保存在含10μM Y-27632的角膜中期保存液中,保存時間為0、1、4、7、14天,未添加Y-27632的角膜中期保存液作為對照組。通過檢測角膜緣上皮細胞的活性率

2、、干細胞克隆形成能力,分析Y-27632對保存的角膜材料中角膜緣干細胞的影響;同時,使用臺盤藍-茜素紅染色觀察中央角膜內皮細胞形態(tài)的變化并計數(shù)內皮細胞活性數(shù),初步評估Y-27632對角膜內皮細胞保存的影響。
　　 結果：
　　 新鮮角膜材料在添加Y-27632的角膜保存液中保存7-14天,分離的角膜緣上皮細胞仍具有較強的細胞活性率及克隆形成能力。對角膜內皮行臺盤藍一茜素紅染色顯示,在添加Y-27632的角膜中期保存液保存

3、14天后,角膜內皮細胞仍能維持其正常形態(tài),活性無明顯變化。
　　 結論：
　　 初步試驗結果顯示,Y-27632可作為角膜中期保存液的添加物,能夠有效延長角膜上皮和角膜內皮細胞在體外的保存時間。
　　 第二部分 ROCK抑制劑在角膜緣干細胞凍存中的作用研究
　　 目的：
　　 通過在角膜緣上皮細胞的體外擴增、凍存復蘇過程中添加ROCK抑制劑Y-27632,觀察其對角膜緣上皮細胞活性和干細胞克隆形成

4、能力的影響。
　　 方法：
　　 將新鮮分離的上皮細胞或經(jīng)過擴增的兔角膜緣上皮細胞凍存,根據(jù)凍存液及培養(yǎng)過程中是否添加Y-27632將細胞進行不同的分組,Y-27632的添加濃度為10μM。觀察各組細胞凍存、復蘇后細胞活性、克隆形成能力等情況,評價Y-27632在角膜緣干細胞低溫凍存、培養(yǎng)中的作用。
　　 結果：
　　 在角膜緣上皮細胞培養(yǎng)過程中添加Y-27632,可顯著促進細胞增殖,提高角膜緣上皮細胞的

5、克隆形成能力。將體外擴增后的角膜緣上皮細胞進行凍存復蘇后發(fā)現(xiàn),只在凍存液中添加Y-27632的細胞,短期凍存復蘇后的細胞,在細胞活性和克隆形成能力未見顯著改變,但中長期凍存(>14天)復蘇后的角膜緣上皮細胞,在細胞活性、增殖和克隆形成能力有明顯提高;在體外擴增和凍存復蘇全程中添加Y-27632時,角膜緣上皮細胞經(jīng)過凍存、復蘇后其活性、增殖能力和克隆形成能力與其它組相比均有顯著提高,且其活性和功能與凍存前的水平相當。
　　 結論：