基于GC-MS技術(shù)原發(fā)性高血壓中醫(yī)證候血清代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：本研究通過應(yīng)用GC/MS代謝組學(xué)研究技術(shù)，對(duì)健康人群、原發(fā)性高血壓病(EH)肝火亢盛證、痰濕壅盛證、陰虛陽亢證、陰陽兩虛證患者血清代謝組進(jìn)行分析，建立高血壓病上述四種證型患者的代謝組學(xué)診斷、判別模型，進(jìn)而篩選、確定原發(fā)性高血壓各證型相關(guān)的生物標(biāo)志物(群)，從代謝組學(xué)水平上探討原發(fā)性高血壓病中醫(yī)“證”的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法：選擇2010年上半年中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院門診、病房和體檢中心的男性原發(fā)性高血壓患者以及體檢健康志愿者

2、，入選的原發(fā)性高血壓患者要求均沒有服用任何降壓藥物，或者已停服各類藥物1周以上。根據(jù)中醫(yī)研究指導(dǎo)原則，辨證屬于肝火亢盛證觀察組18例，痰濕壅盛證16例，陰虛陽亢證15例，陰陽兩虛證15例。隨機(jī)選取在我院體檢的健康對(duì)照組男性15名。抽取受試者空腹12小時(shí)靜脈采血，不抗凝，分離血清，于-86℃冰箱內(nèi)凍存?zhèn)溆?。通過氣象色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GCMS)分析所獲得的代謝指紋圖譜，經(jīng)譜圖預(yù)處理并積分后，對(duì)積分值進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，根據(jù)各樣本的主成分得分作

3、圖，可判別組間差異；進(jìn)一步用PCA以分析進(jìn)行主成分因子負(fù)荷矩陣分析，得出顯著升高或降低的變量，這些變量的組合即為表征病變的“生物標(biāo)記物群”。
　　結(jié)果：①EH患者樣品分布散點(diǎn)圖顯示：健康對(duì)照組與總EH組、健康組與EH各證型組均能明顯的區(qū)分開來。②經(jīng)過分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者相比較健康對(duì)照組的顯著性差異表達(dá)血清代謝物有17種(P<0.05)：其中表達(dá)增高的有尿酸、尿素、棕櫚酸、油酸、蛋氨酸、檸檬酸鹽、亮氨酸、脯氨酸、膽固醇、硬脂

4、酸、乳酸。表達(dá)降低的有甘油酸鹽、丙氨酸、肉豆蔻酸、亞油酸、花生四烯酸、門冬氨酸。③經(jīng)過分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者肝火亢盛證組相比較健康對(duì)照組的顯著性差異表達(dá)血清代謝物有13種(P<0.05)：其中表達(dá)升高的有棕櫚酸、尿酸、檸檬酸鹽、亞油酸、硬脂酸、亮氨酸、纈氨酸、膽固醇。表達(dá)降低的有丙氨酸、油酸、花生四烯酸、門冬氨酸、甘氨酸④經(jīng)過分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者痰濕壅盛證組相比較健康對(duì)照組有顯著性差異表達(dá)血清代謝物有14種(P<0.05)

5、：其中表達(dá)升高的有亮氨酸、甘氨酸、膽固醇、硬脂酸、尿酸、尿素、乳酸、亞油酸、棕櫚酸。表達(dá)降低的有甘油酸鹽、丙氨酸、油酸、花生四烯酸、乙基二乙醇胺。⑤經(jīng)過分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者陰虛陽亢證組相比較健康對(duì)照組的顯著性差異表達(dá)血清代謝物有20種(P<0.05)：表達(dá)升高的有尿酸、尿素、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、膽固醇、硬脂酸、纈氨酸、檸檬酸鹽、棕櫚酸、油酸、甘油酸鹽、肉豆蔻酸。表達(dá)降低的有丙氨酸、乙基二乙醇胺、亞油酸、甘氨酸、花生四烯酸、門

6、冬氨酸、乳酸共20種。⑥經(jīng)過分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者陰陽兩虛證組相比較健康對(duì)照組顯著性差異表達(dá)血清代謝物有20種(P<0.05)：其中表達(dá)升高的有尿酸、尿素、肌酐、甘油酸鹽、蛋氨酸、膽固醇、硬脂酸、纈氨酸、棕櫚酸、油酸、乳酸。表達(dá)降低的有丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、肉豆蔻酸、亞油酸、甘氨酸、花生四烯酸、脯氨酸、門冬氨酸共20種。
　　結(jié)論：①運(yùn)用代謝組學(xué)的研究方法可以成功區(qū)分原發(fā)性高血壓組、原發(fā)性高血壓各證型組和健康對(duì)照組。②經(jīng)

7、過初步分析鑒定得出EH患者血清代謝標(biāo)志物群如下：尿酸、尿素、棕櫚酸、油酸、蛋氨酸、檸檬酸鹽、亮氨酸、脯氨酸、膽固醇、硬脂酸、乳酸表達(dá)增高。甘油酸鹽、丙氨酸、肉豆蔻酸、亞油酸、花生四烯酸、門冬氨酸表達(dá)降低。③經(jīng)過初步分析鑒定得出原發(fā)性高血壓患者肝火亢盛證患者血清代謝標(biāo)志物群如下：其中表達(dá)升高的有棕櫚酸、尿酸、檸檬酸鹽、亞油酸、硬脂酸、亮氨酸、纈氨酸、膽固醇。表達(dá)降低的有丙氨酸、油酸、花生四烯酸、門冬氨酸、甘氨酸④經(jīng)過初步分析鑒定得出EH患

8、者痰濕壅盛證患者血清代謝標(biāo)志物群如下：亮氨酸、甘氨酸、膽固醇、硬脂酸、尿酸、尿素、乳酸、亞油酸、棕櫚酸表達(dá)增高。甘油酸鹽、丙氨酸、油酸、花生四烯酸、乙基二乙醇胺表達(dá)降低。⑤經(jīng)過初步分析鑒定得出EH患者陰虛陽亢證患者血清代謝標(biāo)志物群如下：尿酸、尿素、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、膽固醇、硬脂酸、纈氨酸、檸檬酸鹽、棕櫚酸、油酸、甘油酸鹽、肉豆蔻酸表達(dá)增高。丙氨酸、乙基二乙醇胺、亞油酸、甘氨酸、花生四烯酸、門冬氨酸、乳酸表達(dá)降低。⑥經(jīng)過初步分析鑒定