TGFBI蛋白與多倍體腫瘤及腫瘤耐藥的相關性研究.pdf

1、目的:
　　當今惡性腫瘤發(fā)展迅速，已成為人類健康的嚴重威脅。惡性腫瘤的治療主要包括手術治療、化療及放療，大概有近60％的病人接受化療。紫杉醇作為卵巢癌化療的一線藥物，其有效率可達70％-80％，但是卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30％-40％，主要原因是治療過程中腫瘤出現(xiàn)耐藥，導致化療失敗。據(jù)統(tǒng)計，90％以上腫瘤患者的死亡在不同程度上是受腫瘤耐藥的影響。
　　轉(zhuǎn)化生長因子誘導的基因(transforming growth fac

2、tor-β induced gene，TGFBI)蛋白屬于細胞外基質(zhì)分子之一，最初被關注的是其調(diào)節(jié)細胞粘附和遷移的能力。在不同的腫瘤中，TGFBI蛋白的表達也不相同，如在結腸癌、食管癌、腎癌其表達升高，而在非小細胞肺癌、乳腺癌中表達將低。有研究顯示，TGFBI基因的甲基化與紫杉醇耐藥有關。TGFBI表達的缺失可增加非小細胞肺癌對凋亡的抗性，且增加TGFBI的表達可以提高其對多種化療藥物的敏感性。說明TGFBI蛋白與腫瘤耐藥性有關。

3、>　　許多研究提示多倍體細胞可以引起腫瘤耐藥。我們的前期研究在紡錘絲毒性藥物的誘導下可形成穩(wěn)定生長的多倍體腫瘤細胞MDA-MB-231-T，且該細胞除了對VP16更敏感外，對紫杉醇類、表阿霉素、奧沙利銷、長春新堿及氟尿嘧啶等多種化療藥物都表現(xiàn)為耐藥，且與原腫瘤細胞相比具有顯著性差異。這種多倍體細胞與原代細胞相比，低表達TGFBI蛋白。而將TGFBI基因轉(zhuǎn)染MDA-MB-231-T，發(fā)現(xiàn)可以增加其對紫杉醇的敏感性。那么多倍體腫瘤細胞的發(fā)生

4、、腫瘤細胞的耐藥與TGFBI蛋白的表達三者之間是否有密切聯(lián)系呢？現(xiàn)國內(nèi)外未見報道。
　　本實驗以乳腺癌MDA-MB-231細胞為研究對象，利用細胞轉(zhuǎn)染技術使其瞬時過表達TGFBI蛋白，運用MTT法檢測兩組細胞的細胞生長抑制率，運用流式細胞儀比較兩組細胞的細胞周期、細胞凋亡以及細胞的倍體變化，初步探討TGFBI蛋白與多倍體腫瘤及腫瘤耐藥之間的關系。
　　方法:
　　1.將載有TGFBI基因的質(zhì)粒及空質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染MDA

5、-MB-231細胞，并分為實驗組與對照組。
　　2.利用western blot技術檢測兩組細胞中TGFBI蛋白的表達，驗證轉(zhuǎn)染效果。
　　3.MTT法比較兩組細胞的細胞生長抑制率。
　　4.利用流式細胞儀通過PI染色比較兩組細胞的細胞周期及細胞染色體倍體變化。
　　5.利用流式細胞儀通過Annexin V-FITC/PI法比較兩組細胞的細胞凋亡情況。
　　結果:
　　1.western blot檢測

6、結果顯示:TGFBI蛋白在實驗組高表達，說明TGFBI基因已成功轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞。
　　2.MTT實驗結果顯示:以不同濃度的紫杉醇處理過表達TGFBI蛋白的MDA-MB-231細胞及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組細胞72小時后，相對于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組細胞，過表達TGFBI的細胞表現(xiàn)出更高的生長抑制率。
　　3.細胞周期實驗結果顯示:紫杉醇處理過表達TGFBI蛋白的MDA-MB-231細胞較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組細胞表現(xiàn)出更高的