免疫抑制對ST-239型MRSA毒力因子表達的影響效應研究.pdf

1、目的：
　　研究不同免疫狀態(tài)下ST-239型MRSA毒力因子的表達情況，為結合宿主免疫狀態(tài)對金黃色葡萄球菌毒力因子基因表達的影響提供新的思路和依據(jù)。
　　方法：
　　將SPF清潔級Wistar大鼠隨機分成對照組和模型組，每組12只，雌雄各半。以40mg/kg的環(huán)磷酰胺連續(xù)肌肉注射3天，造成大鼠免疫抑制，在此基礎上通過滴鼻方式滴入小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液，連續(xù)滴注3天，造成免疫抑制MRSA定植模型。對照組將正常大

2、鼠直接鼻腔滴入小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液。細菌定植一定時間后取大鼠鼻粘膜組織，運用實時熒光定量PCR技術分析體內試驗中，不同免疫狀態(tài)下大鼠鼻粘膜組織中分離的MRSA毒力因子在基因水平上的表達差異；同時處死各組動物后，取模型組和對照組動物的血清分別加入TSB培養(yǎng)基，以普通TSB培養(yǎng)基作對照，將MRSA在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，運用實時熒光定量PCR技術分析不同培養(yǎng)條件下不同培養(yǎng)時間點的MRSA毒力因子在基因水平上的表達差異。
　　

3、結果：
　　1.處于免疫抑制狀態(tài)的大鼠較正常大鼠，MRSA更容易在鼻粘膜定植；
　　2.與肌注環(huán)磷酰胺前比較，肌注環(huán)磷酰胺后3天、7天時，大鼠血液學檢查可見外周血WBC、PLT數(shù)量迅速下降，同時RBC、HGB亦明顯降低（P<0.01）；外周血中CD3+T,CD3+CD4+T,CD3+CD8+T淋巴細胞比例明顯降低并且B淋巴細胞以及NK細胞的比例也明顯降低（P<0.01）。外周血血清中免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的含量明顯

4、下降（P<0.01）；
　　3.連續(xù)3次向大鼠鼻腔滴注小劑量高濃度的新鮮MRSA菌懸液，細菌定植一段時間后可穩(wěn)定存在鼻粘膜組織細胞內外；
　　4.體內試驗毒力因子檢測結果表明，定植在模型組大鼠鼻粘膜組織中的MRSA毒力因子hla和spa的表達水平要高于對照組，（P<0.05)，其中目的基因spa的表達水平顯著升高（P<0.01）；
　　5.體外試驗毒力因子檢測結果表明，MRSA在不同環(huán)境下培養(yǎng)不同時間后，細菌毒力因子的

5、表達也存在一定的差異。培養(yǎng)至90min時，模型組與對照組毒力因子hla和spa的表達水平相對于培養(yǎng)0min時變化不明顯（P>0.05）；而在細菌培養(yǎng)至120min時，模型組hla基因的表達水平較對照組顯著升高（P<0.01），且spa基因的表達水平較對照組升高（P<0.05）。
　　結論：
　　1.當宿主處于免疫抑制狀態(tài)時，可能通過促進金黃色葡萄球菌毒力因子的表達增強金黃色葡萄球菌的致病力；
　　2.當MRSA感染宿主