鐮刀菌幾丁質(zhì)合成酶Chs1和Chs2基因小片段RNA干擾功能分析.pdf

1、小麥赤霉?。‵usarium Head Blight，F(xiàn)HB）是由鐮刀菌（Fusarium）引起的一種世界性真菌病害。小麥作為世界第二大糧食作物，缺乏對赤霉病的天然抗性，易造成大規(guī)模的赤霉病害的爆發(fā)，導(dǎo)致產(chǎn)量的大幅下降甚至顆粒無收。因此需要一種有效的方法來增強(qiáng)小麥對赤霉病的抵抗力。RNAi技術(shù)的出現(xiàn)對小麥抗性的提高提供了一個新思路。幾丁質(zhì)是一種真菌細(xì)胞壁的重要組成成分，是由幾丁質(zhì)合成酶(chitinsynthases，Chs)催化合成的

2、，病原真菌通常含有多個幾丁質(zhì)合成酶基因，而植物中未發(fā)現(xiàn)幾丁質(zhì)合成酶的存在，因此幾丁質(zhì)合成酶是抗真菌藥物的理想靶標(biāo)。本研究利用Gateway技術(shù)構(gòu)架了不同的幾丁質(zhì)合成酶（Chs1，Chs2）基因小片段的RNAi表達(dá)載體，通過RNAi技術(shù)篩選出對亞洲鐮刀菌生長發(fā)育和致病力影響較大的基因小片段，為小麥的抗病改良提供材料。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴將幾丁質(zhì)合成酶（Chs1）基因分成5個基因片段，每個基因段都構(gòu)建成具有單個莖環(huán)結(jié)構(gòu)的RNA

3、i表達(dá)載體，通過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法，將基因小片段導(dǎo)入野生型亞洲鐮刀菌5035，定點(diǎn)整合到PLS基因位點(diǎn)，在其體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生干擾小片段。結(jié)果表明，與野生型5035相比，Chs1基因各段RNAi轉(zhuǎn)化子生長遲緩，分生孢子的產(chǎn)量有不同程度的降低，致病力下降了48.2％-68.6％，細(xì)胞壁幾丁質(zhì)含量也下降了11％-23％。⑵與Chs1構(gòu)建方法相同，將Chs2分為5個基因片段，每個片段構(gòu)建成單莖環(huán)的RNAi載體。通過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法，得到真菌轉(zhuǎn)化子，高滲透