注射dsRNA干擾甜菜夜蛾幾丁質(zhì)合成酶基因的表達(dá).pdf

1、幾丁質(zhì)是昆蟲(chóng)生長(zhǎng)和發(fā)育的關(guān)鍵物質(zhì)，任何干擾昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)合成的物質(zhì)都會(huì)對(duì)昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生劇烈的影響，甚至使昆蟲(chóng)死亡。幾丁質(zhì)合成途徑是理想的殺蟲(chóng)劑作用靶標(biāo)。近幾年發(fā)展的RNA干擾技術(shù)為抑制幾丁質(zhì)合成酶基因的表達(dá)提供了一種新方法?！　≡诒緦?shí)驗(yàn)中，作者嘗試從甜菜夜蛾幾丁質(zhì)合成酶基因催化域片斷中選擇3段擬干擾序列，長(zhǎng)度分別為406bp，453bp和260bp，并采用體外轉(zhuǎn)錄的方法合成了對(duì)應(yīng)的dsRNA。將所得的dsRNA注射進(jìn)3齡末期幼蟲(chóng)體內(nèi)

2、，研究其對(duì)目的基因表達(dá)的抑制效果。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，406bp和453bp這2段dsRNA能夠有效地抑制目的基因的表達(dá)，并且在注射4天后抑制效果最佳，而260bp沒(méi)有明顯的抑制效果。但尚未觀察到表型上的不同，可能是時(shí)間不夠長(zhǎng)或樣本量不夠大，也可能是dsRNA的干擾效果在表型上還看不出來(lái)。　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明干涉效果受注射dsRNA的量及其應(yīng)用dsRNA的發(fā)育階段的影響。從注射劑量上看，每頭幼蟲(chóng)要注射dsRNA2.0μg左右才能達(dá)到