Dkk-1-Wnt-β-catenin信號(hào)途徑在肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、本文對(duì)Dkk-1/Wnt/β-catenin信號(hào)途徑在肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容及結(jié)果過(guò)如下： ①將人肝癌細(xì)胞H7402接種聯(lián)合免疫缺陷(SCID)鼠，60天后在SCID鼠身體贏弱時(shí)，引頸處死，取SCID鼠臟器組織進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)，從肺組織中獲得一個(gè)H7402細(xì)胞的轉(zhuǎn)移亞克隆。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果表明，與H7402細(xì)胞相比，有11個(gè)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在M-117402細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)，1

2、3個(gè)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在M-H7402細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)。 ②在建立上述肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移亞克隆的基礎(chǔ)上，比較了具有不同轉(zhuǎn)移能力的H7402細(xì)胞和M-H7402細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)的差異。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)wnt途徑信號(hào)分子Wnt 1及受體Fz和Lrp 5 mRNA的表達(dá)水平在M-H7402細(xì)胞中上調(diào)。Westernblot分析結(jié)果顯示，與H7402細(xì)胞相比，M-H7402細(xì)胞中phospho-β-catenin

3、蛋白和Dkk-1蛋白表達(dá)下調(diào)，而β-catenin蛋白表達(dá)上調(diào)，提示M.H7402細(xì)胞中有B。catenin的積累，而H7402細(xì)胞中大部分的β-catenin已被降解。 ③應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將pcDNA3.1(-)一Dkk-1質(zhì)粒導(dǎo)入M-H7402細(xì)胞。實(shí)現(xiàn)Dkk-1基因瞬時(shí)過(guò)表達(dá)。經(jīng)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，M-H7402細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Dkk-1可導(dǎo)致β-catenin的表達(dá)水平明顯下降，并促使c-Myc、cyclin