長期培養(yǎng)的CIK細胞hTERT基因表達水平的動態(tài)變化.pdf

1、實驗目的:
　　 初步探討長期培養(yǎng)的CIK細胞hTERT基因表達水平的變化,進一步評價CIK細胞治療的安全性。
　　 實驗方法:
　　 抽取3名健康人外周靜脈血進行CIK細胞培養(yǎng),每周臺盼藍染色計數(shù)細胞,實時熒光定量PCR法檢測培養(yǎng)第0、2、7、21及42天的CIK細胞hTERTmRNA基因的表達水平,流式細胞儀分析培養(yǎng)第0、7、14、28、49及56天的CIK細胞周期的改變并檢測凋亡,MTT法測定培養(yǎng)第14、3

2、0天的CIK細胞對肺腺癌LTPEP-a-2細胞系的細胞毒活性。
　　 結(jié)果:
　　 CIK細胞在體外培養(yǎng)第28天至第35天細胞增殖達高峰,分別由第0天的5.6×106、5.6×106、8.0×106增加至第28天的37.5×106,71×106和第35天的127.6×10°,與第0天相比分別擴增6.70、10.76和15.95倍,此后存活細胞逐漸減少,最終約60天左右細胞全部死亡,與流式細胞儀檢測細胞凋亡結(jié)果一致;CIK

3、細胞hTERT表達水平在培養(yǎng)48小時最高,hTERT的CT值在第0天分別為30.57、32.27、30.44,培養(yǎng)至第2天的CT值分別為29.91、31.54、27.86,采用△△CT方法進行定量,使用管家基因β-actin來比較hTERT的相對含量,可見CIK細胞hTERT的表達水平較第0天增加約2.84±1.27倍,隨后隨培養(yǎng)時間延長表達水平下降,在培養(yǎng)1周時降至培養(yǎng)初始水平,并在此后的培養(yǎng)過程中維持低水平表達:在CIK培養(yǎng)1周時處