糖皮質(zhì)激素在慢性應(yīng)激引起的抑郁及其伴發(fā)癥狀中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的影響廣泛的精神疾病,常以興趣缺失，無助絕望，無力，無價(jià)值，注意力不集中，睡眠障礙等為臨床特征。應(yīng)激在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中扮演著重要角色，它作為一種環(huán)境因素促使抑郁癥的發(fā)生和發(fā)展。在正常的生理狀態(tài)下，應(yīng)激會(huì)激活HPA軸，導(dǎo)致腎上腺分泌糖皮質(zhì)激素，應(yīng)激過后糖皮質(zhì)激素水平恢復(fù)到正常。這種短暫而平衡的HPA軸（hipothalamic-pituitary-adrenal,下丘腦-垂體-腎上腺）活動(dòng)為生物體提供了積極的應(yīng)對(duì)反應(yīng)。在

2、應(yīng)激過程中HPA軸作為一個(gè)重要的調(diào)控系統(tǒng)起著平衡激素水平和應(yīng)對(duì)應(yīng)激的行為反應(yīng)作用。HPA軸調(diào)控的一個(gè)重要信號(hào)是通過糖皮質(zhì)激素與其受體結(jié)合發(fā)揮的對(duì)糖皮質(zhì)激素的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。大量的研究表明 HPA軸的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，在長(zhǎng)期處于應(yīng)激環(huán)境中的抑郁患者身上是受到損傷的。抑郁患者常常伴隨著體內(nèi)糖皮質(zhì)激素的升高和在地塞米松/促糖皮質(zhì)激素釋放激素（Dex/CRH）結(jié)合試驗(yàn)中對(duì)地塞米松抑制性反應(yīng)的降低，對(duì)CRH的促分泌反應(yīng)增強(qiáng)。成功的治療常常伴隨著HP

3、A軸的正常化。另外，治愈的患者如果 HPA軸的亢進(jìn)未完全消除，存在著很大的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。雖然糖皮質(zhì)激素在抑郁的發(fā)病過程中起著重要的作用，但具體的作用機(jī)制還不清楚。另外，值得注意的是，在臨床上抑郁患者經(jīng)常伴發(fā)有焦慮樣癥狀，焦慮是不是也是由糖皮質(zhì)激素水平升高引起的值得我們?nèi)ヌ接憽?br>　　在本研究中，我們主要從以下兩方面來對(duì)上述問題進(jìn)行探討：①人工控制糖皮質(zhì)激素水平不升高的情況下，慢性應(yīng)激是否可以誘發(fā)大鼠的抑郁樣行為，并探討其潛在的分子機(jī)制；

4、②人工控制糖皮質(zhì)激素水平不升高的情況下，慢性應(yīng)激是否可以引發(fā)大鼠的焦慮樣行為。
　　首先，我們采用腎上腺摘除手術(shù)，同時(shí)人為補(bǔ)充生理劑量的皮質(zhì)酮的辦法來人工調(diào)控大鼠體內(nèi)的糖皮質(zhì)激素水平。在此基礎(chǔ)上利用慢性應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress, CMS）建立抑郁大鼠模型。然后采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血漿中的皮質(zhì)酮，來驗(yàn)證人工控制糖皮質(zhì)激素水平是否成功。
　　其次，在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，我們采用?qiáng)迫游泳（

5、forced swim test, FST）、糖水試驗(yàn)（sucrose preference test, SPT）來檢測(cè)大鼠的抑郁樣行為。同時(shí)為了排除手術(shù)對(duì)大鼠生理功能的影響，我們也檢測(cè)了大鼠在生理狀態(tài)下覓食情況，并對(duì)其存活率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。我們采用曠場(chǎng)試驗(yàn)（open field test, OFT）對(duì)大鼠的自發(fā)活動(dòng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。同時(shí)采用抗疲勞實(shí)驗(yàn)（anti-fatigue test）對(duì)大鼠體力進(jìn)行了評(píng)估。
　　再次，為了檢驗(yàn)糖皮質(zhì)激素

6、對(duì)大鼠焦慮樣行為的影響，我們采用高架十字（elevated plus maze test, EPMT）和新奇覓食實(shí)驗(yàn)（novelty stressed feed test, NSFT）對(duì)大鼠的焦慮樣行為進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　然后我們選擇與情緒相關(guān)的兩個(gè)腦區(qū)海馬和前額葉皮層檢測(cè)相關(guān)分子的改變。BDNF在神經(jīng)元的存活和神經(jīng)可塑性上發(fā)揮著重要的作用，BDNF的改變預(yù)示著神經(jīng)元功能的改變。GR在抑郁的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。FKBP5在調(diào)節(jié) H

7、PA軸上有重要作用。因此我們采用western blot的方法檢測(cè)這三個(gè)蛋白在海馬和前額葉皮層中的改變。
　　同時(shí)我們采用電子顯微鏡的方法檢測(cè)了前額葉皮層區(qū)（prefrontal cortex, PFC）星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)改變,以及縫隙連接超微結(jié)構(gòu)的改變。并用western blot的方法對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞主要的縫隙連接蛋白之一——連接蛋白43（connexin43, Cx43）的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果顯示，在給予CMS干預(yù)后

8、動(dòng)物出現(xiàn)快感缺失，絕望，焦慮樣行為，說明模型建立成功。在人工調(diào)控糖皮質(zhì)激素水平的情況下，慢性應(yīng)激后動(dòng)物在高架十字迷宮和覓食潛伏期實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出焦慮樣行為。在糖水實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中不表現(xiàn)出抑郁樣行為。同時(shí)，BDNF無論在糖皮質(zhì)激素水平是否升高都表現(xiàn)出蛋白水平明顯下調(diào)。GR和FKBP5的表達(dá)水平在控制糖皮質(zhì)激素水平后得到改善。電鏡數(shù)據(jù)顯示在應(yīng)激的作用下PFC區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的腫脹樣改變，縫隙連接結(jié)構(gòu)不完整，縫隙變寬，Cx43表達(dá)下