蛋白酪氨酸激酶及雷洛昔芬對心肌離子通道調控作用的研究.pdf

1、第一部分蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶對心肌鈉通道調控作用的研究 蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase，PTKs)是參與細胞肥大、增殖、遷移、分化、凋亡等基本生命過程的重要信號分子，可以特異性地磷酸化蛋白肽鏈中的酪氨酸殘基，從而調控蛋白質(包括離子通道蛋白)的功能。蛋白磷酸酶(proteinphosphatase)是指具有催化已磷酸化的蛋白分子發(fā)生去磷酸化反應的一類酶分子，與蛋白激酶相對應存在，共同構成磷酸化和去磷

2、酸化這一重要的蛋白質活性的開關系統(tǒng)，如同“陰”與“陽”說法，形成一種平衡，如蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶(proteintyrosinephosphatases，PTPs)，在蛋白磷酸化及信號轉導中起重要作用。近來諸多研究表明酪氨酸殘基上的蛋白磷酸化可調控離子通道，包括Ca2+通道和某些種類的K+通道，還有容量激活的Cl-通道。關于PTKs如何調控心臟INa的研究很少見，INa是否受PTKs和PTPs相互作用的影響目前也尚不清楚。本

3、研究以豚鼠心室肌細胞為對象，應用多種PTKs和PTPs特異性抑制劑，采取全細胞膜片鉗技術，免疫沉淀和免疫印跡法等研究PTKs和PTPs能否及如何調控INa，為細胞內信號轉導物質對離子通道的調控提供進一步的認識。 一、表皮生長因子受體(EGFR)家族PTK抑制劑B56對豚鼠心室肌細胞鈉電流的影響 二、血小板衍生生長因子受體(platelet-derivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)家族PTK抑制

4、劑TyrphostinAGl295和非受體型Src家族PTK抑制劑PP2對豚鼠心室肌細胞鈉電流的作用 三、PTP抑制劑orthovanadate(VO43-)對豚鼠心室肌鈉電流的影響 四、VO43-對B56作用的影響 五、表皮生長因子(EGF)對豚鼠心室肌鈉電流的影響 六、鈉通道酪氨酸磷酸化水平的變化 結論 1.EGFR家族PTK抑制劑B56顯著性抑制INa，提示EGFR家族PTK可能參與

5、INa的調控。 2.PDGFR家族PTK抑制劑TyrphostinAG1295和非受體型Src家族PTK抑制劑PP2對INa無明顯作用，提示這兩個家族PTK可能不參與INa的調控。 3.PTP抑制劑VO43-顯著性增加INa，提示PTP可能參與INa的調控。 4.VO43-可影響B(tài)56對INa的作用，提示INa可能受PTKs和PTPs相互影響的調控。 5.EGF可顯著性增加INa，提示EGF可能通過EGF

6、R調控INa。 6.鈉通道酪氨酸磷酸化水平發(fā)生相應改變，提示PTPs和EGFR激酶共同影響鈉通道蛋白磷酸化。 本研究為心臟鈉電流受細胞內信號轉導物質的調控提供了新的認識：INa受PTKs和PTPs相互作用的影響，PTPs負向調控INa，而EGFR家族PTK正向調控INa，提示心臟電興奮性可能被PTKs和PTPs的平衡所調控。 第二部分選擇性雌激素受體調節(jié)劑雷洛昔芬對心肌離子通道的影響 雷洛昔芬(Ralox

7、ifene，RLX)是第二代選擇性雌激素受體調節(jié)劑，目前臨床上主要用于治療絕經(jīng)后婦女骨質疏松癥。由于其有良好的組織選擇性，對生殖系統(tǒng)沒有明顯的刺激作用，已引起人們的廣泛關注。已證實雷洛昔芬可通過雌激素受體介導或非雌激素受體依賴機制影響血管壁功能及血脂調節(jié)而發(fā)揮心血管保護作用。近來有研究表明雷洛昔芬可抑制豚鼠心室肌細胞L型鈣電流并縮短動作電位時程。但雷洛昔芬是否影響心臟其它離子通道目前尚未見報導。本工作研究雷洛昔芬對心臟幾種重要的離子通道

8、電流的作用，為進一步探討雷洛昔芬對心臟的直接作用提供新的實驗依據(jù)和理論基礎。 一、雷洛昔芬對人心房瞬時外向鉀電流和超快激活的延遲整流鉀電流的影響 二、17β-雌二醇對人心房瞬時外向鉀電流和超快激活的延遲整流鉀電流的影響 三、雷洛昔芬對克隆的人心臟延遲整流鉀電流的影響 結論 1.雷洛昔芬可明顯抑制Itol和Ikur,且作用不受雌激素受體拮抗劑ICI182，780的影響。 2.17β-雌二醇對