酪氨酸激酶抑制劑對(duì)T細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩51頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:觀察酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosine kinase inhibitor,TKI)舒尼替尼、??颂婺帷⒍蚵逄婺釋?duì)人T淋巴細(xì)胞的影響。初步探討酪氨酸激酶抑制劑與生物免疫治療聯(lián)合的可行性。
  方法:應(yīng)用免疫磁珠分選的方法從外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分選出T淋巴細(xì)胞,分別加入舒尼替尼、??颂婺帷⒍蚵逄婺崤囵B(yǎng)1小時(shí)后,加入PMA刺激T細(xì)胞增殖,培養(yǎng)48-72小

2、時(shí)后分別收集細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)上清。采用四氮甲唑蘭比色法(MTT法)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。流式細(xì)胞儀測(cè)定各組T細(xì)胞亞群分布的變化情況,并檢測(cè)各組T細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化。采用ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β的分泌水平。應(yīng)用LDH法檢測(cè)酪氨酸激酶抑制劑對(duì)T細(xì)胞特異性殺瘤活性的影響。
  結(jié)果:1.對(duì)T細(xì)胞增殖的影響:本研究比較了培養(yǎng)72小時(shí)后各組細(xì)胞的增殖情況,發(fā)現(xiàn)舒尼替尼、埃

3、克替尼、厄洛替尼均能夠抑制T細(xì)胞的增殖,各組抑制率如下:舒尼替尼50ng/ml組為25.6±5.4%(P=0.015),100ng/ml組為43.2±1.8%(P=0.001),200ng/ml組為66.0±4.4%(P=0.001);??颂婺?000ng/ml組為12.0±5.0%(P=0.053),2500ng/ml組為20.0±3.6%(P=0.011),5000ng/ml組為21.6±5.6%(P=0.022);厄洛替尼500n

4、g/ml組為27.6±2.7%(P=0.003),1500ng/ml組為35.0±2.0%(P=0.001),3000ng/ml組為49.1±1.3%(P<0.001)。2.對(duì)T細(xì)胞凋亡的影響:采用Annexin-Ⅴ-PI染色法測(cè)定各組細(xì)胞在培養(yǎng)48小時(shí)后的凋亡比例,各組凋亡比例如下:對(duì)照組25.2±2.7%,舒尼替尼50ng/ml組24.3±2.9%,100ng/ml組28.7±1.2%,200ng/ml組27.0±3.3%;埃克替尼

5、1000ng/ml組28.4±2.3%,2500ng/ml組28.1±3.3%,5000ng/ml組29.7±2.8%;厄洛替尼500ng/ml組27.6±3.5%,1500ng/ml組25.5±2.3%,3000ng/ml組28.6±2.3%。各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡比例與對(duì)照組細(xì)胞凋亡比例均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。3.對(duì)T細(xì)胞周期分布的影響:各組細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后,測(cè)定各組細(xì)胞的細(xì)胞周期分布情況,舒尼替尼、??颂婺?、厄洛替尼能夠?qū)細(xì)

6、胞阻滯在G0/G1期,各組G0/G1期細(xì)胞比例如下:對(duì)照組:92.87±1.60%,舒尼替尼組:50ng/ml組92.61±1.22%(P=0.83),100ng/ml組95.43±0.61%(P=0.06),200ng/ml組96.82±1.09%(P=0.024);??颂婺峤M:1000ng/ml組92.00±0.92%(P=0.46),2500ng/ml組94.07±2.34%(P=0.50),5000ng/ml組94.75±2.2

7、4%(P=0.30);厄洛替尼組:500ng/ml組94.30±3.14%(P=0.52),1500ng/ml組94.72±1.65%(P=0.235),3000ng/ml組96.05±1.05%(P=0.045)。4.對(duì)T細(xì)胞亞群的影響:各組細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后測(cè)定各組細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者對(duì)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例無(wú)明顯影響,與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),同時(shí)發(fā)現(xiàn)舒尼替尼各濃度

8、組均能夠下調(diào)CD4+CD25+CD127-Treg細(xì)胞的比例,與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而??颂婺峤M和厄洛替尼分別在5000ng/ml、3000ng/ml時(shí)實(shí)驗(yàn)組Treg細(xì)胞百分比較對(duì)照組下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。5.對(duì)細(xì)胞因子分泌的影響:培養(yǎng)72小時(shí)后,舒尼替尼能夠抑制IFN-γ、IL-2、TGF-β的分泌,對(duì)IL-10抑制作用較弱,對(duì)IL-4的分泌未產(chǎn)生影響;??颂婺崾筎GF-β分泌下降,而對(duì)IFN-γ

9、、IL-2、IL-4、IL-10均未產(chǎn)生影響;厄洛替尼抑制了IFN-γ、IL-2、TGF-β的分泌,而對(duì)IL-4、IL-10未產(chǎn)生影響。6.T細(xì)胞殺傷活性的變化:培養(yǎng)72小時(shí)后,舒尼替尼、??颂婺?、厄洛替尼均使T細(xì)胞的殺傷活性下降,效靶比40∶1時(shí)對(duì)照組殺傷率為63.2±8.5%,實(shí)驗(yàn)組各組殺傷率為:舒尼替尼50ng/ml組為45.9±1.2%(P=0.026),100ng/ml組為18.3±1.4%(P=0.001),200ng/ml

10、組為4.3±3.9%(P<0.001);埃克替尼1000ng/ml組為71.4±7.9%(P=0.289),2500ng/ml組為49.1±6.4%(P=0.084),5000ng/ml組為29.4±11.7%(P=0.016);厄洛替尼組500ng/ml組為30.8±5.6%(P=0.005),1500ng/ml組為22.3±1.6%(P=0.001),3000ng/ml組為19.6±9.8%(P=0.004),效靶比20∶1時(shí)對(duì)照組

11、殺傷率為39.7±6.2%,實(shí)驗(yàn)組各組殺傷率如下:舒尼替尼50ng/ml組為29.4±9.7%(P=0.195),100ng/ml組為12.1±6.4%(P=0.006),200ng/ml組為1.4±0.9%(P<0.001);??颂婺?000ng/ml組為42.5±7.4%(P=0.646),2500ng/ml組為11.4±8.1%(P=0.009),5000ng/ml組為10.4±6.4%(P=0.005);厄洛替尼組500ng/m

12、l組為38.0±6.7%(P=0.755),1500ng/ml組為17.5±9.4%(P=0.027),3000ng/ml組為17.5±6.5%(P=0.013)。
  結(jié)論:酪氨酸激酶抑制劑能夠抑制T細(xì)胞的增殖及部分細(xì)胞因子的分泌,同時(shí)能夠下調(diào)Treg細(xì)胞的比例,將細(xì)胞阻滯在G0/G1期可能是抑制T細(xì)胞增殖的機(jī)制之一,酪氨酸激酶抑制劑能夠抑制T細(xì)胞的殺傷活性,??颂婺釋?duì)T細(xì)胞功能的影響要弱于厄洛替尼和舒尼替尼對(duì)T細(xì)胞功能的影響,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論