酪氨酸激酶Syk與胃癌關(guān)系研究.pdf

1、背景：在我國絕大部分胃癌患者就診時(shí)已屬晚期，其治療難點(diǎn)之一是如何預(yù)防和治療轉(zhuǎn)移。對信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白HER2的研究為乳腺癌轉(zhuǎn)移的治療開辟了新的方向，一些研究認(rèn)為另一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Syk(spleentyrosinekinase)與HER2功能相反，對惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移可能有抑制作用，故本研究對Syk與胃癌的關(guān)系進(jìn)行了研究。 Syk是一種廣泛表達(dá)在造血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞上的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中起著重要

2、的作用。Syk基因首先是從豬脾cDNA文庫中分離出來的，所以稱脾酪氨酸蛋白激酶，分子量為72KD，位于人類第9號(hào)染色體長臂q22上。 1.酪氨酸激酶SykmRNA在胃癌中的表達(dá)檢測及其臨床意義 目的：探索酪氨酸激酶SykmRNA的表達(dá)與胃癌生成和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法:用RT-PCR檢測4株胃癌細(xì)胞株SykmRNA的表達(dá)，檢測44例胃癌及癌旁正常胃組織標(biāo)本中SykmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：4株胃癌細(xì)胞株有2株S

3、yk基因表達(dá)缺失，所有癌旁胃組織都有Syk基因的表達(dá)，而44例胃癌組織中只有10例有表達(dá)，癌旁正常胃組織與胃癌組織中Syk基因表達(dá)率差異有顯著性(X2=9.14，P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的35例胃癌組織中，2例有Syk基因表達(dá)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的9例胃癌組織中有8例檢測到SykmRNA的表達(dá)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中SykmRNA的表達(dá)率顯著降低(X2=23.66，P＜0.05)。 結(jié)論:Syk基因的表達(dá)對胃癌的生長及轉(zhuǎn)移可能起

4、抑制作用。 2.Syk蛋白表達(dá)與胃癌關(guān)系的研究 目的:探索胃癌組織中Syk蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理的關(guān)系。 方法:采用S-P免疫組化法檢測44例胃癌組織、癌旁組織中Syk蛋白、p53蛋白表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果:44例胃癌鄰近正常組織中有36例Syk蛋白陽性表達(dá)，44例胃癌組織中有6例陽性，癌旁正常胃組織Syk陽性率高于胃癌組織(X2=35.53，P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的35例

5、胃癌組織沒有檢測到Syk蛋白的陽性表達(dá)，9例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織有6例Syk蛋白陽性表達(dá)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織Syk蛋白陽性表達(dá)率顯著高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(X2=21.65，P＜0.05)。Syk蛋白表達(dá)與p53蛋白(突變型)表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(X2=6.18，P＜0.05)。 結(jié)論：Syk蛋白的表達(dá)抑制了胃癌的生長及轉(zhuǎn)移，Syk蛋白的表達(dá)是p53依賴性的。 3.Syk基因表達(dá)與胃癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系 目的：研究Syk的

6、表達(dá)與胃癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系 方法：用流式細(xì)胞儀檢測44例胃癌組織腫瘤細(xì)胞凋亡，分析Syk表達(dá)陽性組與Syk表達(dá)陰性組胃癌細(xì)胞凋亡的情況。 結(jié)果：Syk陽性表達(dá)的10例胃癌組織的凋亡率為27.39﹪±4.47﹪，34例Syk陰性的胃癌組織的凋亡率為3.47﹪±2.18﹪，Syk陽性表達(dá)的胃癌組織的凋亡率顯著高于Syk表達(dá)陰性組(t=3.47，P＜0.05)。 結(jié)論：Syk的表達(dá)與胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)。 4.酪氨酸

7、激酶Syk啟動(dòng)子甲基化與胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移的關(guān)系 目的：探討Syk基因啟動(dòng)子甲基化與胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移過程的關(guān)系。 方法；采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測4株胃癌細(xì)胞株、44例胃癌組織、癌旁組織中Syk基因啟動(dòng)子甲基化情況，并分析Syk基因啟動(dòng)子甲基化情況與胃癌的生成、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果：4株胃癌細(xì)胞株中有2株檢測有Syk基因啟動(dòng)子甲基化。44例胃癌旁組織未發(fā)現(xiàn)有Syk基因啟動(dòng)子的甲基化，44例癌組織中有17例檢測到

8、Syk基因啟動(dòng)子的甲基化，癌組織Syk基因啟動(dòng)子甲基化率顯著增高(X2=20.83，P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的35例胃癌組織中，有17例Syk基因啟動(dòng)子甲基化，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的9例胃癌組織未檢測到有Syk基因的甲基化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Syk基因啟動(dòng)子甲基化顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(X2=5.22，P＜0.05)。 結(jié)論；Syk基因啟動(dòng)子甲基化是導(dǎo)致Syk基因失活的原因之一，Syk基因啟動(dòng)子的甲基化可能與胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移相關(guān)。

9、 5.Syk基因的再表達(dá)對胃癌生長、轉(zhuǎn)移影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 目的:探討去甲基化酶5-氮-2'-脫氧胞苷對Syk基因再表達(dá)的影響及其Syk基因的再表達(dá)對胃癌腫瘤生成和發(fā)展的影響。 方法：RT-PCR和MSP法檢測SGC7901、MGC803、MKN28、MKN45細(xì)胞株中Syk基因表達(dá)及甲基化情況，用5-氮-2'-脫氧胞苷處理人胃癌細(xì)胞株MSGC7901后，檢測此細(xì)胞株中Syk基因的甲基化及再表達(dá)情況，并用此處理過的細(xì)胞株和

10、未經(jīng)處理的細(xì)胞株分別接種于裸鼠皮下，觀察裸鼠成瘤率情況。 結(jié)果:SGC7901、MKN45細(xì)胞株中沒有檢測到Syk基因的表達(dá)，但可檢測到Syk基因的甲基化。MSP檢測用5-氮-2'-脫氧胞苷處理過的人胃癌SGC7901細(xì)胞株，Syk基因啟動(dòng)子沒有甲基化，RT-PCR可檢測到有Syk基因。用有Syk基因再表達(dá)的SGC7901細(xì)胞株接種于10只裸鼠皮下，8周后有3只形成腫瘤，而無Syk基因表達(dá)細(xì)胞株10只都形成腫瘤。對照組的成瘤率及