污水處理廠耐β-內(nèi)酰胺類抗生素乳糖發(fā)酵型腸道桿菌耐藥基因的研究.pdf

1、隨著抗生素在臨床治療和畜牧業(yè)上的廣泛使用，近年來在環(huán)境中越來越多的檢測到了抗性菌株的存在?？剐晕⑸锏拇嬖趯θ祟愐约皠游锏慕】狄呀?jīng)造成了很大的威脅，β-內(nèi)酰胺類抗生素是目前使用最廣泛的一類抗生素，在經(jīng)過半個世紀的使用之后目前環(huán)境中已經(jīng)充斥了多種β-內(nèi)酰胺抗性菌株。本文研究了市政污水廠進水、活性污泥和出水中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)乳糖發(fā)酵型腸道桿菌的表型和基因型的特性，以及質(zhì)粒介導產(chǎn)生的AmpC酶的分布，并初步探討了造成污水廠細

2、菌產(chǎn)生抗性的機制和原因。
　　 在本研究中首先采用了傳統(tǒng)微生物學方法，對污水廠中采集的水樣進行分離培養(yǎng)，并在選擇培養(yǎng)基上添加了β-內(nèi)酰胺類抗生素分離出了β-內(nèi)酰胺類抗性菌株。實驗結(jié)果表明，在分離出的抗性乳糖發(fā)酵型腸道桿菌占總?cè)樘前l(fā)酵型腸道桿菌的70％以上，雖然在經(jīng)過一系列的處理工藝后，污水中抗性菌的比例有了一定程度上的降低，紫外前后抗性菌株比例由67％降低到10％左右，但是很大一部分細菌還是隨著污泥和出水進入了環(huán)境中。
　

3、　 對從污水處理廠分離出的558株β-內(nèi)酰胺抗性菌株采用現(xiàn)代分子生物學技術(shù)，分析了污水廠中耐β-內(nèi)酰胺抗性菌株中ESBLs和質(zhì)粒介導的AmpC酶的基因型。檢測到的B-內(nèi)酰胺酶編碼基因有：TEM、SHV、CTX-MU、ACT、DHA、CMY，其中TEM的檢出率高達50.39％-100％，此外CTX-MU和CMY的檢出率分別為14.87％和11.83％，未檢測出ACC基因型。在檢測出的抗性菌株中，攜帶一種基因型占49.8％，攜帶兩種基因型

4、為18.6％，三種及三種以上基因型比列為5.4％。
　　 通過對分離出的558株抗性菌株中含多重耐藥基因菌株中隨機選取了17株提取了質(zhì)粒DNA，并且檢測了位于質(zhì)粒DNA上的抗性基因。從研究結(jié)果可以看出，在質(zhì)粒DNA上都檢測到了抗性基因的存在，證明了目前大多數(shù)抗性酶是通過質(zhì)粒介導產(chǎn)生。通過16SrDNA測序，檢測到這些細菌同大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、氣單胞菌、弗氏檸檬酸菌和志賀氏菌的同源性都在99％以上。
　　 本研究針對含

5、有兩種以上抗性基因型的111株抗性菌株檢測其中I類整合子以及基因盒的存在情況。從實驗結(jié)果可以看出，26.1％的抗性菌株攜帶了I類整合子基因，15.2％的攜帶耐藥基因盒，檢測到同時攜帶I類整合子-基因盒系統(tǒng)的抗性細菌陽性率為10.81％。
　　 為了確定環(huán)境中大量抗性細菌產(chǎn)生的原因，在本研究中以細菌接合實驗輔助耐藥基因定位，對抗性基因的水平轉(zhuǎn)移進行了一系列的研究。結(jié)果表明污水廠中抗性細菌中確實存在這抗性基因的水平轉(zhuǎn)移，通過基因突變