產(chǎn)ESBLs枸櫞酸桿菌的多重耐藥性研究.pdf

1、隨著抗菌藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用，在抗菌藥物的選擇壓力下，細(xì)菌的耐藥性逐漸增強(qiáng)。多重耐藥菌的出現(xiàn)給臨床治療帶來(lái)很大困難，已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。細(xì)菌的耐藥機(jī)制主要包括以下幾種：①滅活酶的產(chǎn)生；②膜通透性下降；③主動(dòng)外排功能；④靶位改變。不同的細(xì)菌其耐藥機(jī)制也不同，尤其是對(duì)不同的抗菌藥物。例如腸桿菌科細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的耐藥機(jī)制主要是β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生。由于不同的細(xì)菌對(duì)每一類抗菌藥物的耐藥機(jī)制不同，這就需要我們對(duì)其耐藥機(jī)制進(jìn)行深入研究

2、，以便研制新的抗菌藥物來(lái)對(duì)抗細(xì)菌的多重耐藥性。枸櫞酸桿菌不僅是人類腸道的正常寄居菌，也是重要的條件致病菌，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，可引起人類腸道、泌尿道、呼吸道、創(chuàng)傷以及嚴(yán)重的院內(nèi)感染等。枸櫞酸桿菌對(duì)常用的抗菌藥物（如β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和喹諾酮類等藥物）的耐藥性日益嚴(yán)重，出現(xiàn)了多重耐藥菌，針對(duì)這一現(xiàn)象，研究產(chǎn)ESBLs枸櫞酸桿菌的多重耐藥性是否與整合子有關(guān)，進(jìn)一步檢測(cè)耐藥基因型、確定耐藥傳播方式、尋找治療產(chǎn)ESBLs多重耐藥菌株的藥物

3、，為控制此類細(xì)菌的傳播以及臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 本文采用K-B法（紙片擴(kuò)散法）對(duì)臨床分離的枸櫞酸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，用頭孢硝噻吩紙片法進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)；采用WHONET5.4軟件對(duì)懷疑產(chǎn)ESBLs、AmpC酶菌株進(jìn)行初步篩選，用ESBLs確證試驗(yàn)檢測(cè)菌株是否產(chǎn)生ESBLs用三維試驗(yàn)確定產(chǎn)ESBLs菌株；用改良AmpC酶紙片法、三維試驗(yàn)檢測(cè)菌株是否產(chǎn)AmpC酶并進(jìn)行比較。采用TEM、SHV、CTX-M組引物對(duì)產(chǎn)ESBL

4、s菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)，并對(duì)TEM陽(yáng)性的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序；采用文獻(xiàn)報(bào)道的AmpC酶6對(duì)引物進(jìn)行多重PCR檢測(cè)，確定基因型；對(duì)菌株進(jìn)行qnr、I類整合子基因檢測(cè)，并對(duì)整合子可變區(qū)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，確定耐藥基因盒的種類和數(shù)量，驗(yàn)證整合子在耐藥傳播中的作用；應(yīng)用質(zhì)粒接合傳遞試驗(yàn)了解耐藥基因的傳遞方式。研究的68株枸櫞酸桿菌中，弗勞地枸櫞酸桿菌占86.8％（59/68）、異型枸櫞酸桿菌占5.9％（4/68）、丙二酸鹽枸櫞酸

5、桿菌占5.9％（4/68），布氏枸櫞酸桿菌占1.4％（1/68）；β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性60株，陽(yáng)性率88.2％；三維試驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)ESBLs菌株17株（占25％），高產(chǎn)AmpC酶菌株3株（占4.4％）。68株枸櫞酸桿菌中，通過(guò)改良AmpC紙片表型法、三維試驗(yàn)以及多重PCR檢測(cè)，有17株產(chǎn)AmpC酶基因，其中3株高產(chǎn)AmpC菌株為CIT型、14株誘導(dǎo)型AmpC基因?yàn)镈HA型；而三維試驗(yàn)僅檢測(cè)到3株高產(chǎn)AmpC菌株，未檢測(cè)到誘導(dǎo)型AmpC酶。在17

6、株產(chǎn)ESBLs菌株中，通過(guò)采用TEM、SHV、OXA、CTX-M引物進(jìn)行PCR檢測(cè)，13株產(chǎn)生TEM，通過(guò)DNA測(cè)序?yàn)門EM-1型；17株ESBLs的基因型均為CTX-M型。對(duì)產(chǎn)ESBLs菌株進(jìn)行qnr基因檢測(cè)，9株qnrA型基因陽(yáng)性，陽(yáng)性率為52.9％。I類整合子及其可變區(qū)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有11株攜有I類整合子，對(duì)其中的兩株可變區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)攜帶aadA2和dfrl7兩種基因盒，分別編碼氨基糖苷類和磺胺類抗菌藥物的耐藥性。

7、質(zhì)粒接合傳遞試驗(yàn)，17株ESBLs菌株傳遞成功，PCR檢測(cè)，12株接合子攜有CTX-M基因，5株接合子同時(shí)攜有CTX-M和qnrA基因。用WHONET5.4軟件對(duì)產(chǎn)ESBLs菌株進(jìn)行藥敏分析，臨床分離的產(chǎn)酶枸櫞酸桿菌對(duì)亞胺培南100％敏感，對(duì)其他抗菌藥物耐藥嚴(yán)重。
　　 本研究得出以下結(jié)論：⑴臨床分離的產(chǎn)ESBLs枸櫞酸桿菌呈現(xiàn)多重耐藥性，檢出率達(dá)25％，其耐藥菌株往往攜有多種耐藥基因。⑵我院臨床分離的產(chǎn)ESBLs枸櫞酸桿菌中檢