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文檔簡介
1、背景:
高脂血癥是動脈粥樣硬化最常見的危險因素之一。研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)是在動脈粥樣硬化斑塊周圍出現(xiàn)異常表達的炎性介質(zhì),基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor
2、 ofmetalloproteinase-1,TIMP-1)對于調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性具有重要作用。既往研究表明,MMP-2及MMP-9能促進平滑肌遷移、增殖,進而可以促進動脈粥樣硬化斑塊的形成以及破裂;而TIMP-1的高表達則可以減少動脈內(nèi)膜的增厚,延緩動脈粥樣硬化斑塊的形成。因此,干預(yù)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達對動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展及防治有重要的意義。
目前,大量研究表明存在于食物內(nèi)的黃酮類化合物,如:柚皮素,
3、葛根總黃酮,蒲黃等均具有防治動脈粥樣硬化的作用。而芹菜素(Apigenin,4',5,7-三羥基黃酮)是一種廣泛存在于多種水果、蔬菜、豆類和茶葉中,尤以芹菜中含量很高的黃酮類化合物。芹菜素對高脂飲食喂養(yǎng)的ApoE基因缺陷(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成以及斑塊穩(wěn)定性的作用目前尚不清楚。
目的:
采用ApoE-/-小鼠建立經(jīng)典的動脈粥樣硬化模型,觀察小鼠主
4、動脈粥樣硬化斑塊病變的情況,明確芹菜素是否具有抗動脈粥樣硬化的作用及增加粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的作用,為臨床防治動脈粥樣硬化提供新的思路。
方法:
雄性ApoE-/-小鼠,30只,8周齡,以普通飼料適應(yīng)性地喂養(yǎng)1周后,隨機分為3組。對照組(Control group,n=10):給予高脂飼料(普通小鼠粉料+15%豬油+1.25%膽固醇);芹菜素組(Apigenin group,n=10):給予高脂飼料喂養(yǎng)同時予以芹菜素1
5、0 mg/kg.d灌胃;阿托伐他汀組(Atorvastatingroup,n=10):高脂飼料喂養(yǎng)同時給予阿托伐他汀原藥10mg/kg.d灌胃。各組小鼠均自由攝食及攝水,12周后檢測以下指標(biāo):
1.測定各組小鼠的體重以及頸動脈血壓的情況;
2.測定各組小鼠的血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的情況;
3.觀察粥樣硬化病變的情況:石蠟切片
6、后,行HE染色,觀察各組小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊情況;
4.石蠟切片,行Masson染色,觀察各組小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊內(nèi)膠原含量情況;
5.采用免疫組化法及蛋白免疫印跡法檢測各組小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-3、MMP-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子TIMP-1的表達。
結(jié)果:
1.三組小鼠的體重、頸動脈血壓無顯著差異(P>0.05);
2.芹菜
7、素組甘油三酯與對照組相比無顯著差異性(P>0.05),芹菜素組的高密度脂蛋白明顯增高,與對照組相比差異顯著(P<0.01),總膽固醇及低密度脂蛋白與對照組相比減少,具有顯著差異性(P<0.05);阿托伐他汀組與對照組相比總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白均明顯降低,高密度脂蛋白明顯增高,有顯著差異(P<0.01);芹菜素組與阿托伐他汀組相比,總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白有顯著差異(P<0.05);
3.芹菜素組
8、及阿托伐他汀組的斑塊面積與對照組相比,明顯減少,存在顯著差異(P<0.05或P<0.01);芹菜素組與阿托伐他汀組相比,斑塊面積較大,具有差異(P<0.05);
4.芹菜素組ApoE-/-小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊內(nèi)膠原含量較對照組增加(P<0.05),阿托伐他汀組斑塊內(nèi)膠原含量較對照組有明顯增加(P<0.01),芹菜素組與阿托伐他汀相比主動脈根部斑塊內(nèi)膠原含量較少,存在差異(P<0.05);
5.免疫組化結(jié)果:芹菜
9、素組及阿托伐他汀組與對照組相比,ApoE-/-小鼠主動脈粥樣斑塊內(nèi)MMP-2、MMP-3、MMP-9表達明顯減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);阿托伐他汀組與芹菜素組相比,ApoE-/-小鼠主動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)MMP-2、MMP-3、MMP-9表達減少(P<0.05)。芹菜素組較對照組TIMP-1表達有增加趨勢,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);阿托伐他汀組與對照組相比TIMP-1的表達明顯增加(P<0.01);
6
10、.Western blot結(jié)果:芹菜素組及阿托伐他汀組與對照組相比,MMP-2、MMP-3、MMP-9在蛋白的表達上減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);與芹菜素組相比,阿托伐他汀組MMP-2、MMP-3、MMP-9表達減少(P<0.05);芹菜素組與對照組比較,TIMP-1表達增加,差異顯著(P<0.05),阿托伐他汀組與對照組相比TIMP-1表達有顯著增加(P<0.01),芹菜素組表達少于阿托伐他汀組,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P
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