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文檔簡介
1、目的:研究抗apoB-100抗體抑制apoE-/-小鼠動脈粥樣硬化病變發(fā)展的可能機制—抑制炎癥反應和促進膽固醇逆向轉運。
方法:雄性6周齡C57BL/6J背景的apoE-/-小鼠隨機分成四組,每周檢測小鼠體重變化。7周齡開始每3周分別給予弗氏佐劑(F-Adjuvant)、弗氏佐劑+apoB-100抗原肽段、牛血清白蛋白(BSA)、apoB-100抗體干預,22周齡時結束干預。干預過程中自7周齡開始每隔3周采取小鼠眼眶靜脈血EL
2、ISA法測試apoB-100抗體滴度。干預結束后采集血液標本,分離肝臟、心臟及主動脈并在-80℃液氮中凍存;檢測血清炎癥因子IL-6、TNFα、CRP、MCP-1濃度及血脂TG、TC、HDL、LDL濃度;分離出單個核細胞用于RT-PCR法檢測 PPARα、ABCG1、ACTA、SR-BI、NF-κB及CD36的基因表達和用于EMSA法檢測PPARα及NF-κB的活性。Western法檢測ACAT、ABCA1、ABCG1、NF-κB、CD
3、36的蛋白表達情況。油紅O染色檢測主動脈中動脈粥樣硬化斑塊面積占主動脈面積的百分比。將心臟制作冰凍切片后行油紅O、CD68、mason染色,分別計算各自的面積及面積百分比。流式細胞術檢測CD35和CD68的表達。
結果:干預結束時小鼠體重有明顯增加,但各組間小鼠體重無統計學差異。各組小鼠apoB-100抗體滴度均有增加,但apoB-100抗原組及apoB-100抗體組與弗氏佐劑組和牛血清白蛋白組相比,小鼠 apoB-100抗體
4、滴度開始增加時間較早且濃度明顯較高。主動免疫干預和被動免疫干預對apoE-/-小鼠血清TC和血清LDL均無顯著影響;主動脈免疫干預較被動免疫干預能降低血清TG和增加血清HDL濃度。免疫干預能夠降低apoE-/-小鼠的血清炎癥因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、MCP-1,并且主動免疫干預比被動免疫干預降低血清炎癥因子的作用更加明顯。主動免疫干預和被動免疫干預均能使炎癥因子NF-κB、膽固醇受體CD36基因和蛋白水平降低而膽固醇代謝相
5、關因子SR-BI、ABCG1、ACAT1、PPARα的均增高。EMSA法檢測結果顯示:免疫干預后核蛋白PPARα活性增加,而NF-kB活性降低。油紅O染色表明免疫干預組與對照組相比動脈粥樣硬化斑塊面積與動脈面積百分比有明顯下降,主動脈竇斑塊面積也明顯下降。免疫組化結果顯示免疫干預組與對照組相比斑塊中巨噬細胞均明顯下降而膠原蛋白均明顯增多。流式細胞術結果顯示免疫干預組與對照組相比,脾細胞中表達 CD68+CD64+(Fc受體)的單個核細胞
6、有顯著性增多,表達CD68+CD35+(CR受體)的單個核細胞顯著性減少。
結論:1、抗apoB-100抗體可以抑制動脈粥樣硬化的發(fā)展,穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊,降低斑塊內巨噬細胞含量;2、抗apoB-100抗體能促進膽固醇逆向轉運代謝和抑制機體的炎癥反應;3、抗apoB-100抗體可能是由于抑制了巨噬細胞對ox-LDL的抗原題呈和抑制了通過CD36受體對oxLDL的不飽和吞噬,從而避免激活炎癥反應和增強巨噬細胞Fc受體調理作用,
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