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1、在大多數(shù)細(xì)胞的膜脂質(zhì)中,磷脂占總量的70%以上而且種類繁多。細(xì)胞膜中的脂質(zhì)成分與細(xì)胞特性密切相關(guān)。本研究采用基質(zhì)輔助激光解吸/電離-傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜法(MALDI-FTICR MS),對(duì)不同腫瘤細(xì)胞進(jìn)行原位脂類分子研究,旨在快速尋找區(qū)分不同細(xì)胞之間的差異脂類分子。本研究主要包括3部分:
1、MALDI-FTICR MS原位表征人乳腺癌細(xì)胞的膜脂
采用MALDI-FTICR MS,分別對(duì)人類乳腺上皮細(xì)胞(MC
2、F-10A)和六種不同乳腺癌細(xì)胞系(即BT-20、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-157和MDA-MB-361)的膜脂質(zhì)組分在沒(méi)有經(jīng)過(guò)脂質(zhì)提取和分離的前提下進(jìn)行原位檢測(cè)。偏最小二乘判別分析(PLS-DA),相關(guān)性分析及聚類分析的結(jié)果表明膜脂水平的改變與乳腺細(xì)胞的類型密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A中的多不飽和脂類水平比六種乳腺癌細(xì)胞的高;來(lái)源于原發(fā)腫瘤的BT-20癌細(xì)胞中的多不飽和脂類水平比
3、其他五種來(lái)源于轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞的高。免疫印跡分析表明五種脂肪生成相關(guān)的酶(脂肪酸合成酶1(FASN1)、硬脂酰輔酶A去飽和酶1(SCD1)、硬脂酰輔酶A去飽和酶5(SCD5)、膽堿激酶(CKα)和鞘磷脂合酶1(SMS1))的表達(dá)與乳腺細(xì)胞類型相關(guān)。在MCF-7細(xì)胞中SCD1表達(dá)水平相對(duì)于其他乳腺細(xì)胞系顯著增加。我們的研究結(jié)果表明,在乳腺癌細(xì)胞中FASN1、SCD1、SCD5和CKα表達(dá)水平的升高可能與其飽和和單不飽和脂類水平的增加密切相關(guān)。
4、
2、MALDI-FTICR MS原位表征人肺癌細(xì)胞的膜脂
為了進(jìn)一步將膜脂表型與非小型細(xì)胞肺癌(NSCLC)的分類聯(lián)系起來(lái),采用MALDI-FTICR MS對(duì)來(lái)源于三種亞型的NSCLC細(xì)胞系(A549、H1650、H1975、H157、H1703和H460)的膜脂質(zhì)組分進(jìn)行原位檢測(cè)。PLS-DA分析結(jié)果表明,其中15個(gè)脂質(zhì)分子(PE(36∶1), PI(38∶4), SM(42∶2), PE(36∶4), PE(3
5、6∶2), PC(36∶2), SM(34∶1),PA(38∶3),C18∶0,C22∶4,PA(34∶2),C20∶5,C20∶2,C18∶2和CerP(36∶2))對(duì)應(yīng)的投影重要性指標(biāo)(variab1e importance in the projection,VIP)值>1.0并認(rèn)為是區(qū)分不同NSCLC細(xì)胞的重要變量。在肺腺癌細(xì)胞特別是H1975細(xì)胞中觀察到多不飽和脂肪酸(C20∶4,C22∶4,C22∶5和C22∶6)與多不飽和
6、磷脂(PE(36∶4),PE(38∶4)和PI(38∶4))的正相關(guān)性明顯。同時(shí),聚類分析結(jié)果表明,基于C18∶1,C20∶1,C20∶2,C20∶5和C22∶6的表達(dá)不同可將三株肺腺癌細(xì)胞(A549、H1650和H1975)從其他NSCLC細(xì)胞中區(qū)分開(kāi)來(lái)。
3、采用MALDI-FTICR MS動(dòng)態(tài)原位監(jiān)測(cè)DHA處理的乳腺癌細(xì)胞的膜脂質(zhì)變化
二十二碳六烯酸(C22∶6,DHA)是一種n-3多不飽和脂肪酸并具有抗癌作用
7、。本研究選取低劑量的DHA(0、10和40μM)用于研究DHA對(duì)乳腺上皮細(xì)胞(MCF-10A)和乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)的膜脂質(zhì)分布的影響。隨著DHA處理時(shí)間的延長(zhǎng),DHA使癌細(xì)胞中的脂肪酸(C20∶5,C22∶4,C20∶3和C20∶1)水平、脂肪酸延長(zhǎng)酶指標(biāo)(C22∶4/C20∶4,C22∶5/C20∶5和C20∶1/C18∶1)以及磷脂酰膽堿(PC(30∶0),PC(32∶0),PC(38∶6)和PC(40∶7))水平變
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