肝素和HS對乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的：
　　1、研究人正常乳腺上皮細胞（MCF-10A）合成的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate, HS）和不同分子量肝素（Heparin, HP）對乳腺癌細胞增殖能力的影響。
　　2、研究HPs和HS對乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　3、探討HPs和HS對乳腺癌細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases, MMPs）與肝素酶（heparanase，HSPE）表達的影響。<

2、br>　　4、檢測不同乙?；潭鹊牡头肿恿扛嗡兀↙ow molecular-weight-heparin, LMWH）對乳腺癌細胞增殖活性的影響。
　　方法：
　　1、提取MCF-10A細胞匯合期培養(yǎng)液中的HS鏈，以濃度100、200、400、800、1600 mg·L-1的HS和三種分子量的HPs（UFH（12.5KD）、LMWH-A（<8KD） and LMWH-B（3.5～5.5KD））以濃度312.5、625、125

3、0、2500、5000 ug·L-1作用于MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞24、48、72小時后采用MTT比色法，檢測細胞活性。并據(jù)此實驗計算HS和HPs的IC50。
　　2、以乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞為研究對象，使用Transwell法明確 HS和 HPs對三株細胞的侵襲能力以及遷移力的影響；細胞劃痕實驗觀察細胞的遷移能力。
　　3、以乳腺癌MCF-7和MD

4、A-MB-435細胞為對象，用 HS和 HPs處理24h后， Western blot檢測MMP-2和MMP-9的表達；同上處理細胞，ELISA檢測HPs和HS對乳腺癌細胞肝素酶活性表達的影響。
　　4、MTT比色法檢測不同乙酰化程度的LMWHs對乳腺癌細胞增殖活性的影響。
　　結(jié)果：
　　一、HS和HPs對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞的增殖抑制
　　作用
　　MTT法結(jié)

5、果顯示，HS和HPs均能抑制三種乳腺癌細胞的增殖活性，其抑制活性隨著作用時間和濃度的增加也隨之增加。HPs和HS的最高濃度作用于MCF-7細胞對細胞的抑制活性強度是HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS組與HPs組的抑制率相比，有顯著性差異（p<0.05）；HPs和HS的最高濃度作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞的增殖抑制活性同樣是HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS組與HPs組的抑制率相比，有顯

6、著性差異（p<0.05）。
　　二、HS和HPs對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響
　　1、HS和 HPs可以使 Transwell侵襲模型中乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞侵入濾膜的細胞數(shù)減少，且與對照組相比均有顯著差異(p<0.01)；使侵襲細胞數(shù)目減少的程度為 HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且 HS與HPs相比也有顯著差異

7、（p<0.05）。
　　2、HS和 HPs可以使 Transwell轉(zhuǎn)移模型中乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞侵入濾膜的細胞數(shù)減少，且與對照組相比均有顯著差異（p<0.01）；使轉(zhuǎn)移細胞數(shù)目減少的程度為HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS與HPs相比也有顯著差異（p<0.05）。
　　3、在劃痕并給藥0h的時候各組劃痕邊緣清晰，劃痕區(qū)域無遷移細胞；24h后各組有不同程度的愈合，劃

8、痕區(qū)域遷移入部分細胞；在給藥48h后，對照組劃痕幾乎愈合，而HPs和HS的劃痕愈合程度為HS　　三、HPs和HS對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435細胞MMP-2、MMP-9表達的影響
　　HPs和HS均可以下調(diào)MMP-2和MMP-9蛋白表達，其下調(diào)的程度是HS最強，其次依次為LMWH-B、LMWH-A、UFH。而在侵襲轉(zhuǎn)移能力弱的MCF-7細胞中， MMP-2、MMP-9幾乎不表

9、達。
　　四、HPs和HS對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435細胞HSPE表達的影響
　　HPs和HS均可降低MCF-7、MDA-MB-435細胞中HSPE的表達，與對照組相比均有顯著差異（p<0.01）；且HS與HPs相比也具有顯著差異（p<0.05）。
　　五、不同程度乙酰化產(chǎn)物對MCF-7細胞增殖活性的影響
　　與原料藥LMWH相比，NO.2、NO.9乙?；a(chǎn)物對MCF-7細胞的增殖抑制作用降低（p<0

10、.05）；NO.1、NO.5、NO.6、NO.7、NO.8、NO.10乙?；a(chǎn)物對MCF-7細胞的增殖抑制作用與原料藥物無顯著性差異（p>0.05）； NO.3、NO.4乙?；a(chǎn)物對MCF-7細胞的增殖抑制作用增強（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、HPs和HS對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞具有抑制作用，且這一作用的強度為HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，HPs和HS對腫瘤細胞

11、的增殖抑制作用有助于抑制腫瘤細胞的生長。
　　2、HPs和HS具有抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞侵襲和轉(zhuǎn)移活性的作用，且這一作用的強度為HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。
　　3、HPs和HS對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435細胞中MMP-2、MMP-9具有顯著的抑制作用且作用強度為HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。對MMP-2、MMP-9蛋白的抑制作用可以抑制腫瘤

12、細胞的侵襲活性，這可能是 HPs和 HS具有抑制腫瘤細胞侵襲活性的原因之一，而對于 MMP-2、MMP-9不同的抑制程度可能是構(gòu)成HPs和HS對侵襲抑制能力強弱不同的機制之一。
　　4、HPs和HS對乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435細胞中HSPE表達具有顯著的抑制作用且作用強度為HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。HSPE活性的降低使得細胞外基質(zhì)的屏障固化，從而減少了腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。HSPE活性降低的不同程度可能