ASIC3在耐藥性癲癇患者及大鼠模型腦組織中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、有研究發(fā)現(xiàn)酸敏感離子通道(ASICs)對(duì)癲癇的發(fā)生及中止可能有著重要作用。酸敏感離子通道3(ASIC3)作為ASICs家族中對(duì)細(xì)胞外pH值變化反應(yīng)最敏感的一個(gè)亞型，同時(shí)表達(dá)在大鼠的周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)(PNS)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。本研究的目的只要有了解ASIC3在耐藥性癲癇患者及大鼠模型腦組織中的表達(dá)是否發(fā)生了變化，并通過(guò)癲癇大鼠模型及細(xì)胞模型探討ASIC3在耐藥性癲癇中的功能及可能的機(jī)制。我們從課題組先前收集的腦組織標(biāo)本庫(kù)中隨機(jī)選取25

2、例耐藥性顳葉癲癇(TLE)患者手術(shù)切除的顳葉皮質(zhì)作為病例組，收集10例無(wú)癲癇及其他疾病的腦外傷患者行減壓術(shù)后的顳葉皮質(zhì)作為對(duì)照組，用熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)ASIC3基因mRNA水平的變化，用western blot、免疫組化及免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)ASIC3蛋白的表達(dá)變化及表達(dá)部位;同步建立癲癇大鼠模型，用相同的實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證ASIC3的表達(dá)變化，并通過(guò)注射ASIC3特異性的抑制劑APETx2，觀察大鼠行為學(xué)的變化，以期發(fā)現(xiàn)

3、ASIC3在癲癇中的功能;采用膜片鉗技術(shù)在癲癇細(xì)胞模型中分別觀察APETx2對(duì)椎體細(xì)胞及中間神經(jīng)元的影響來(lái)檢測(cè)ASIC3的可能作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)ASIC3在顳葉癲癇患者腦皮質(zhì)中mRNA水平顯著降低，但在蛋白水平較對(duì)照組升高;ASIC3蛋白主要表達(dá)于神經(jīng)元的胞膜與胞漿，較少的表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞的胞體處，樹(shù)突處未見(jiàn)表達(dá);ASIC3與抑制性的GABAergic的中間神經(jīng)元共表達(dá);以上這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果在動(dòng)物模型中都得到了驗(yàn)證。研究表明注射APETx