STGC3基因高表達(dá)對Daudi細(xì)胞系生長增殖影響的研究.pdf

1、目的：鼻咽癌相關(guān)新基因STGC3是一候選抑癌基因，在Burkitt氏淋巴瘤表達(dá)下調(diào)，推測STGC3基因表達(dá)的改變，可能參與了淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗在前期研究工作的基礎(chǔ)上，采用電穿孔基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將STGC3基因?qū)隓audi細(xì)胞系，探討STGC3高表達(dá)，對Burkitt氏淋巴瘤Daudi細(xì)胞系生長增殖的影響，為進(jìn)一步闡明Burkitt氏淋巴瘤發(fā)病機(jī)理提供實(shí)驗依據(jù)。 方法：應(yīng)用電穿孔基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將pCDNA3.1(+)/STG

2、C3真核表達(dá)載體導(dǎo)入Daudi細(xì)胞系，經(jīng)G418篩選，挑選陽性克隆，Western blotting方法，檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中STGC3的蛋白表達(dá)，建立高表達(dá)STGC3基因的Daudi細(xì)胞系；通過轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系生長曲線繪制、軟瓊脂集落形成、流式細(xì)胞儀檢測、免疫組織化學(xué)及HE染色等方法檢查，分析STGC3基因高表達(dá)，對轉(zhuǎn)基因Daudi細(xì)胞倍增時間、增殖速度、集落形成率、細(xì)胞周期及凋亡的影響。 結(jié)果：在轉(zhuǎn)染STGC3基因的Daudi細(xì)胞系中

3、，Western blotting檢測證實(shí)，STGC3的蛋白表達(dá)水平顯著增高，免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示STGC3定位于Daudi細(xì)胞的胞漿與胞核。與未轉(zhuǎn)染的Daudi細(xì)胞及轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒的Daudi細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染STGC3的Daudi細(xì)胞增殖速度明顯減慢（P＜0.05）, 克隆形成率顯著減低（P＜0.01）；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，瘤細(xì)胞群體中處于G0/G1期細(xì)胞數(shù)增加，S期比例下降，細(xì)胞阻滯于G0/G1期。 結(jié)論： 1．成