敲低Sp1對CNE2細(xì)胞STGC3表達(dá)及惡性表型的影響.pdf

1、目的：探明Sp1基因在鼻咽癌CNE2細(xì)胞中對STGC3基因表達(dá)的調(diào)控作用，研究敲低Sp1基因表達(dá)對CNE2細(xì)胞生長增殖、侵襲及遷移的影響。
　　方法：
　　1.構(gòu)建慢病毒GTP-HIS-Sp1干擾載體，將干擾載體轉(zhuǎn)染于CNE2細(xì)胞，建立 Sp1基因低表達(dá)的 CNE2細(xì)胞系（GTP-HIS-Sp1-CNE2）；通過qRT-PCR及Western Blotting方法，從mRNA及蛋白質(zhì)水平，檢測Spl基因的表達(dá)狀況，確定GTP

2、-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞成功建立。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組為，實(shí)驗(yàn)組 GTP-HIS-Sp1-CNE2，空載體組GTP-HIS-CNE2及對照組CNE2，采用qRT-PCR及Western Blotting方法，從mRNA及蛋白質(zhì)水平，檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞與對照組間 STGC3基因的表達(dá)差異，分析 Sp1對 CNE2細(xì)胞中 STGC3基因表達(dá)的調(diào)控作用；施用流式細(xì)胞儀、MTS、Transwell及細(xì)胞克隆形成方

3、法，檢測敲低Sp1基因表達(dá)后，CNE2細(xì)胞生長增殖、侵襲、遷移及非停泊依賴性生長能力的變化。
　　結(jié)果：
　　1.構(gòu)建載體經(jīng)DNA測序鑒定，證實(shí)GTP-HIS-Sp1慢病毒載體成功構(gòu)建；以病毒滴度為5.0×108 TU/mL，將GTP-HIS-Sp1感染CNE2細(xì)胞，qRT-PCR及Western Blotting方法，檢測結(jié)果顯示，感染后， CNE2細(xì)胞中 Sp1的表達(dá)降低， Sp1基因被敲低，表明GTP-HIS-Sp1-

4、CNE2細(xì)胞成功建立。
　　2. qRT-PCR及Western Blotting 檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞STGC3基因表達(dá)，結(jié)果顯示，敲低Sp1基因表達(dá)，在mRNA和蛋白質(zhì)水平，均顯示出STGC3表達(dá)被恢復(fù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低Sp1基因表達(dá)，可上調(diào)STGC3的表達(dá)，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Sp1對STGC3基因起負(fù)調(diào)控作用。
　　3.MTS實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均顯示，敲低Sp1基因表達(dá)，

5、CNE2細(xì)胞的生長增殖速度減慢，克隆形成能力降低；Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，敲低Sp1基因表達(dá)，CNE2細(xì)胞遷移及侵襲能力明顯降低；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示， GTP-HIS-Sp1-CNE2組 G1期細(xì)胞比例為78.31％，細(xì)胞凋亡率約為14.56％，空載體與未轉(zhuǎn)染 CNE2組，G1期細(xì)胞比例分別為68.26％、67.33％，凋亡率分別約為9.9%和10.42％，實(shí)驗(yàn)證實(shí) Sp1基因表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致 CNE2細(xì)胞阻滯于 G1期，細(xì)胞