敲低Sp1對CNE2細胞STGC3表達及惡性表型的影響.pdf

1、目的：探明Sp1基因在鼻咽癌CNE2細胞中對STGC3基因表達的調(diào)控作用，研究敲低Sp1基因表達對CNE2細胞生長增殖、侵襲及遷移的影響。
　　方法：
　　1.構(gòu)建慢病毒GTP-HIS-Sp1干擾載體，將干擾載體轉(zhuǎn)染于CNE2細胞，建立 Sp1基因低表達的 CNE2細胞系（GTP-HIS-Sp1-CNE2）；通過qRT-PCR及Western Blotting方法，從mRNA及蛋白質(zhì)水平，檢測Spl基因的表達狀況，確定GTP

2、-HIS-Sp1-CNE2細胞成功建立。
　　2.實驗分組為，實驗組 GTP-HIS-Sp1-CNE2，空載體組GTP-HIS-CNE2及對照組CNE2，采用qRT-PCR及Western Blotting方法，從mRNA及蛋白質(zhì)水平，檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細胞與對照組間 STGC3基因的表達差異，分析 Sp1對 CNE2細胞中 STGC3基因表達的調(diào)控作用；施用流式細胞儀、MTS、Transwell及細胞克隆形成方

3、法，檢測敲低Sp1基因表達后，CNE2細胞生長增殖、侵襲、遷移及非停泊依賴性生長能力的變化。
　　結(jié)果：
　　1.構(gòu)建載體經(jīng)DNA測序鑒定，證實GTP-HIS-Sp1慢病毒載體成功構(gòu)建；以病毒滴度為5.0×108 TU/mL，將GTP-HIS-Sp1感染CNE2細胞，qRT-PCR及Western Blotting方法，檢測結(jié)果顯示，感染后， CNE2細胞中 Sp1的表達降低， Sp1基因被敲低，表明GTP-HIS-Sp1-

4、CNE2細胞成功建立。
　　2. qRT-PCR及Western Blotting 檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細胞STGC3基因表達，結(jié)果顯示，敲低Sp1基因表達，在mRNA和蛋白質(zhì)水平，均顯示出STGC3表達被恢復，差異有統(tǒng)計學意義，實驗證實敲低Sp1基因表達，可上調(diào)STGC3的表達，進一步實驗證實了Sp1對STGC3基因起負調(diào)控作用。
　　3.MTS實驗及克隆形成實驗，結(jié)果均顯示，敲低Sp1基因表達，

5、CNE2細胞的生長增殖速度減慢，克隆形成能力降低；Transwell實驗結(jié)果表明，敲低Sp1基因表達，CNE2細胞遷移及侵襲能力明顯降低；流式細胞儀檢測結(jié)果顯示， GTP-HIS-Sp1-CNE2組 G1期細胞比例為78.31％，細胞凋亡率約為14.56％，空載體與未轉(zhuǎn)染 CNE2組，G1期細胞比例分別為68.26％、67.33％，凋亡率分別約為9.9%和10.42％，實驗證實 Sp1基因表達下調(diào)，導致 CNE2細胞阻滯于 G1期，細胞