四類(lèi)天然產(chǎn)物的生物活性研究.pdf

1、本論文主要對(duì)四類(lèi)天然產(chǎn)物進(jìn)行了生物活性研究，包括：1. 地花菌(Albatrellus confluens)中的地花菌素；2. 干巴菌(Thelephora ganbajun)中三種對(duì)聯(lián)三苯類(lèi)化合物; 3. 石櫟木(Lithocarpus pachyphyllus)中三種二氫查耳酮葡萄糖苷類(lèi)化合物; 4. 巖白菜素及其衍生物。另外對(duì)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型及治療藥物的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。 論文選題主要圍繞研究組其它成員的

2、植物化學(xué)研究成果，選擇其中四類(lèi)天然產(chǎn)物進(jìn)行有關(guān)體內(nèi)外生物活性及機(jī)制研究，為今后進(jìn)一步的研究開(kāi)發(fā)奠定了重要基礎(chǔ)。對(duì)重要的天然產(chǎn)物生物活性進(jìn)行研究也是近年來(lái)植物化學(xué)研究的發(fā)展趨勢(shì)，對(duì)天然藥物研究和開(kāi)發(fā)具有重要意義。 1.地花菌素的生物活性研究 地花菌素(albaconol)是本研究組成員從云南產(chǎn)地花菌(Albatrellus confluens)中提取分離得到的一個(gè)新骨架類(lèi)型化合物，結(jié)構(gòu)部分已發(fā)表。本論文對(duì)其生物活性進(jìn)行了

3、如下研究： 1.1地花菌素誘導(dǎo)豚鼠氣管平滑肌收縮及脫敏作用 實(shí)驗(yàn)研究地花菌素對(duì)離體豚鼠氣管平滑肌的收縮及脫敏作用，以及受體vanilloid receptor (VR)激動(dòng)劑辣椒素、拮抗劑capsazepine及細(xì)胞外Ca2+對(duì)其作用的影響，探討地花菌素的這種作用是否通過(guò)VR受體而起作用。結(jié)果證明，雖然地花菌素及辣椒素都引起氣管平滑肌收縮，但地花菌素效價(jià)不及辣椒素，它們的-log(M)EC50值分別為4.23+0.18

4、(n=10)及7.33+2.1(n=10)。2.5 mM capsazepine(VR拮抗劑)競(jìng)爭(zhēng)性地拮抗地花菌素及辣椒素的收縮作用。地花菌素增強(qiáng)低濃度辣椒素(10-10－10-9M)的收縮反應(yīng)，卻非競(jìng)爭(zhēng)性地拮抗高濃度辣椒素(10-8－10-3 M)的作用。地花菌素(1或100 mM)及辣椒素(3或10 mM)都能降低離體豚鼠氣管平滑肌第二次接觸地花菌素的反應(yīng)，即引起脫敏反應(yīng)。Capsazepine(5.0 mM)明顯抑制這種脫敏反應(yīng)。

5、細(xì)胞外Ca2+對(duì)于地花菌素的收縮反應(yīng)是關(guān)鍵的，但并不影響上述脫敏反應(yīng)。總之，上述結(jié)果提示，地花菌素為VR部分激動(dòng)劑，誘導(dǎo)離體豚鼠氣管的收縮和脫敏反應(yīng)。 1.2地花菌素的體外抗氧化活性 體外評(píng)價(jià)地花菌素抗氧化活性，測(cè)定其對(duì)大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化、超氧化物歧化酶(SOD)、1，1-二苯基-2-苦基肼 (DPPH)自由基的影響。結(jié)果證明，地花菌素抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化水平，IC50為104.2 mg/mL，陽(yáng)性對(duì)照叔丁基甲氧基

6、苯酚(BHA)及維生素E(VE) IC50分別是40.4和127.2 mg/mL。 地花菌素提高SOD活性，EC50為106.3 mg/mL，而B(niǎo)HA EC50為76.4 mg/mL。另外，地花菌素具有一定的清除DPPH自由基作用，EC50為51.9 mg/mL, BHA EC50 為19.9 mg/mL。上述結(jié)果提示地花菌素通過(guò)提高抗氧化酶SOD活性及質(zhì)子供體作用，體外抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，具有體外抗氧化活性。 1.3地花菌素的抗

7、傷害作用 采用一定強(qiáng)度溫?zé)岽碳ぜ盎瘜W(xué)刺激，引起疼痛反應(yīng)，觀察地花菌素的抗傷害作用。地花菌素(6、12 mM/kg，iv)顯著延長(zhǎng)熱板法小鼠舔足反應(yīng)潛伏期及熱水縮尾法小鼠縮尾潛伏期。地花菌素(3、6、12 mM/kg，iv)明顯抑制醋酸(0.6 ﹪，0.1 mL/10g，ip)誘導(dǎo)的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。地花菌素(6 mM/kg，iv)的抗傷害作用可被VR激動(dòng)劑辣椒素(0.125 mM/kg，iv)所增強(qiáng)，而被VR拮抗劑capsazep

8、ine(20 mM/kg，iv)所抑制。另外，地花菌素的刺激性弱于辣椒素。結(jié)果提示地花菌素可能通過(guò)激動(dòng)VR，具有體內(nèi)抗傷害作用。 2.干巴菌中對(duì)聯(lián)三苯類(lèi)化合物的抗氧化活性 本研究組成員從云南產(chǎn)干巴菌(Thelephora ganbajun)中分離鑒定了一系列對(duì)聯(lián)三苯類(lèi)化合物(干巴菌素A-G)，結(jié)構(gòu)鑒定部分已經(jīng)發(fā)表。本論文選擇其中含量較大的化合物(1，2，3)進(jìn)行了抗氧化活性研究。我們對(duì)化合物1、2、3進(jìn)行了對(duì)大鼠肝勻

9、漿的脂質(zhì)過(guò)氧化活性、SOD及DPPH自由基清除方面的實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)證明化合物1、2、3抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化水平，IC50分別為400、48、54 mM，VE及BHA IC50為295、222 mM?；衔?、2、3提高大鼠肝勻漿SOD活性，EC50分別為182、74、204 mM，BHA EC50為424 mM。另外，化合物1、2、3也具有清除DPPH活性，EC50分別為49、1233、55 mM，BHA EC50為110 mM。結(jié)

10、果提示化合物1、2、3具有體外抗氧化活性，其活性不僅取決于其提高抗氧化酶SOD活性，也由于其對(duì)DPPH自由基的清除作用。 3.石櫟木二氫查耳酮葡萄糖苷化合物的生物活性研究 3.1 體外抗氧化活性 三種甜味二氫查耳酮葡萄糖苷類(lèi)化合物，即trilobatin2’’-acetate(1)、phlorin(2)和trilobatin(3)，是從石櫟木Lithocarpus pachyphyllus葉中提取分離得到的。其

11、中化合物3在葉中含量高達(dá)1﹪。為探討其體外抗氧化活性，本研究實(shí)驗(yàn)測(cè)定了其對(duì)于大鼠肝勻漿中脂質(zhì)過(guò)氧化水平、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)及DPPH自由基的影響。結(jié)果顯示，化合物1、2、3均抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化水平，IC50 分別為124.6、12.0、38.2 mg/mL，陽(yáng)性對(duì)照BHA及VE IC50分別為40.4、127.2 mg/mL.化合物1、2、3不僅增強(qiáng)SOD活性(EC50分別為275.1、7

12、2.2、55.8 mg/mL，BHA為76.4 mg/mL)，而且提高GSH-Px活性(EC50分別為342.8、151.4、56.2 mg/mL，VE為112.6 mg/mL)。化合物1、2、3在清除DPPH自由基方面活性較弱(EC50分別為247.9、950.8、188.6 mg/mL，BHA為19.9 mg/mL)。提示化合物1、2、3主要通過(guò)提高抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化水平，從而具有較強(qiáng)的抗氧化活性，這種活性強(qiáng)弱與它的分子結(jié)

13、構(gòu)及取代基位置有關(guān)。 3.2 對(duì)高脂血癥小鼠的調(diào)節(jié)血脂及抗氧化作用 為進(jìn)一步研究三個(gè)二氫查耳酮葡萄糖苷化合物在動(dòng)物體內(nèi)生物活性，實(shí)驗(yàn)建立高脂血癥模型小鼠(灌胃給予高脂乳劑，連續(xù)7天)，將受試物灌胃給予小鼠(連續(xù)7天)，測(cè)定血清或肝組織中總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平。與正常對(duì)照組比較，高脂乳劑

14、誘導(dǎo)的高脂血癥模型組的TC、LDL-C、LPO水平明顯上升，而HDL-C、SOD、GSH-Px水平明顯下降。與模型組比較，62.5，250 mg/kg化合物2、3明顯抑制高脂乳劑造成的TC、LDL-C上升，同時(shí)化合物2 (高、低劑量)及化合物3 (高劑量組)顯著升高HDL-C；另外，化合物1 (250 mg/kg)明顯降低LDL-C，而升高HDL-C。化合物1、2、3 (62.5，250 mg/kg)都明顯抑制高脂乳劑造成的血清和肝組織

15、LPO水平上升；與模型組比較，除了化合物3 (低劑量)外，其余各劑量 (62.5，250 mg/kg)的化合物均顯著升高血清或肝組織的SOD活性及GSH-Px活性(約為模型組的1－3倍)；并且三個(gè)化合物升高GSH-Px活性比VE強(qiáng)。另外，實(shí)驗(yàn)還證明具有降血脂作用的陽(yáng)性藥物非諾貝特(250 mg/kg，ig)具有抗氧化活性，而VE(250 mg/kg，ig)也具有一定降脂活性。結(jié)果提示化合物1、2、3對(duì)高脂血癥小鼠具有降脂及抗氧化作用。

16、 4.巖白菜素及其衍生物的生物活性初步研究 4.1 巖白菜素及其衍生物的止咳、祛痰活性初步篩選 本課題組成員通過(guò)修飾結(jié)構(gòu)，運(yùn)用成熟的有機(jī)反應(yīng)合成了系列巖白菜素衍生物，以期改變其油/水分配系數(shù)，增加療效，延長(zhǎng)半衰期，篩選出部分鎮(zhèn)咳作用更強(qiáng)的衍生物。 本論文初步篩選研究了巖白菜素(1)及其衍生物(2，3，4)在動(dòng)物體內(nèi)的止咳、祛痰活性。通過(guò)枸櫞酸溶液噴霧，反射性地引起豚鼠咳嗽，觀察巖白菜素(1)及其衍生物2、3、4(

17、ip)對(duì)化學(xué)性刺激引起咳嗽的影響。另外，毛細(xì)管法測(cè)定巖白菜素及其衍生物(ip)對(duì)大鼠痰液量分泌的影響。結(jié)果表明，巖白菜素及其衍生物2、4(62.5 mg/kg)明顯延長(zhǎng)豚鼠噴霧枸櫞酸咳嗽潛伏期，巖白菜素及衍生物2明顯減少豚鼠枸櫞酸噴霧咳嗽次數(shù)，其中巖白菜素衍生物2對(duì)豚鼠噴霧枸櫞酸引咳的止咳活性較其巖白菜素、衍生物4效果更顯著。毛細(xì)管法測(cè)定大鼠痰液量實(shí)驗(yàn)表明，巖白菜素及其衍生物2 (62.5、250 mg/kg) 劑量依賴(lài)性地明顯增加大鼠

18、痰液量分泌，但衍生物3、4高低劑量沒(méi)有明顯增加痰液量分泌。提示巖白菜素及其衍生物2具有增加大鼠痰液量的作用，從而具有祛痰效應(yīng)，并且衍生物2作用較巖白菜素強(qiáng)。 5. 高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型及治療藥物研究進(jìn)展 對(duì)近年來(lái)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，從病因上主要包括飲食型及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，而從動(dòng)物品系上包括了靈長(zhǎng)類(lèi)、兔、鳥(niǎo)類(lèi)、嚙齒類(lèi)的大鼠、小鼠等。另外，對(duì)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化治療藥物進(jìn)行了綜述，包括