四類天然產(chǎn)物的生物活性研究.pdf

1、本論文主要對四類天然產(chǎn)物進行了生物活性研究，包括：1. 地花菌(Albatrellus confluens)中的地花菌素；2. 干巴菌(Thelephora ganbajun)中三種對聯(lián)三苯類化合物; 3. 石櫟木(Lithocarpus pachyphyllus)中三種二氫查耳酮葡萄糖苷類化合物; 4. 巖白菜素及其衍生物。另外對高脂血癥及動脈粥樣硬化動物模型及治療藥物的研究進展進行了綜述。 論文選題主要圍繞研究組其它成員的

2、植物化學研究成果，選擇其中四類天然產(chǎn)物進行有關(guān)體內(nèi)外生物活性及機制研究，為今后進一步的研究開發(fā)奠定了重要基礎。對重要的天然產(chǎn)物生物活性進行研究也是近年來植物化學研究的發(fā)展趨勢，對天然藥物研究和開發(fā)具有重要意義。 1.地花菌素的生物活性研究 地花菌素(albaconol)是本研究組成員從云南產(chǎn)地花菌(Albatrellus confluens)中提取分離得到的一個新骨架類型化合物，結(jié)構(gòu)部分已發(fā)表。本論文對其生物活性進行了

3、如下研究： 1.1地花菌素誘導豚鼠氣管平滑肌收縮及脫敏作用 實驗研究地花菌素對離體豚鼠氣管平滑肌的收縮及脫敏作用，以及受體vanilloid receptor (VR)激動劑辣椒素、拮抗劑capsazepine及細胞外Ca2+對其作用的影響，探討地花菌素的這種作用是否通過VR受體而起作用。結(jié)果證明，雖然地花菌素及辣椒素都引起氣管平滑肌收縮，但地花菌素效價不及辣椒素，它們的-log(M)EC50值分別為4.23+0.18

4、(n=10)及7.33+2.1(n=10)。2.5 mM capsazepine(VR拮抗劑)競爭性地拮抗地花菌素及辣椒素的收縮作用。地花菌素增強低濃度辣椒素(10-10－10-9M)的收縮反應，卻非競爭性地拮抗高濃度辣椒素(10-8－10-3 M)的作用。地花菌素(1或100 mM)及辣椒素(3或10 mM)都能降低離體豚鼠氣管平滑肌第二次接觸地花菌素的反應，即引起脫敏反應。Capsazepine(5.0 mM)明顯抑制這種脫敏反應。

5、細胞外Ca2+對于地花菌素的收縮反應是關(guān)鍵的，但并不影響上述脫敏反應?？傊?，上述結(jié)果提示，地花菌素為VR部分激動劑，誘導離體豚鼠氣管的收縮和脫敏反應。 1.2地花菌素的體外抗氧化活性 體外評價地花菌素抗氧化活性，測定其對大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化、超氧化物歧化酶(SOD)、1，1-二苯基-2-苦基肼 (DPPH)自由基的影響。結(jié)果證明，地花菌素抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化水平，IC50為104.2 mg/mL，陽性對照叔丁基甲氧基

6、苯酚(BHA)及維生素E(VE) IC50分別是40.4和127.2 mg/mL。 地花菌素提高SOD活性，EC50為106.3 mg/mL，而BHA EC50為76.4 mg/mL。另外，地花菌素具有一定的清除DPPH自由基作用，EC50為51.9 mg/mL, BHA EC50 為19.9 mg/mL。上述結(jié)果提示地花菌素通過提高抗氧化酶SOD活性及質(zhì)子供體作用，體外抑制脂質(zhì)過氧化，具有體外抗氧化活性。 1.3地花菌素的抗

7、傷害作用 采用一定強度溫熱刺激及化學刺激，引起疼痛反應，觀察地花菌素的抗傷害作用。地花菌素(6、12 mM/kg，iv)顯著延長熱板法小鼠舔足反應潛伏期及熱水縮尾法小鼠縮尾潛伏期。地花菌素(3、6、12 mM/kg，iv)明顯抑制醋酸(0.6 ﹪，0.1 mL/10g，ip)誘導的小鼠扭體反應次數(shù)。地花菌素(6 mM/kg，iv)的抗傷害作用可被VR激動劑辣椒素(0.125 mM/kg，iv)所增強，而被VR拮抗劑capsazep

8、ine(20 mM/kg，iv)所抑制。另外，地花菌素的刺激性弱于辣椒素。結(jié)果提示地花菌素可能通過激動VR，具有體內(nèi)抗傷害作用。 2.干巴菌中對聯(lián)三苯類化合物的抗氧化活性 本研究組成員從云南產(chǎn)干巴菌(Thelephora ganbajun)中分離鑒定了一系列對聯(lián)三苯類化合物(干巴菌素A-G)，結(jié)構(gòu)鑒定部分已經(jīng)發(fā)表。本論文選擇其中含量較大的化合物(1，2，3)進行了抗氧化活性研究。我們對化合物1、2、3進行了對大鼠肝勻

9、漿的脂質(zhì)過氧化活性、SOD及DPPH自由基清除方面的實驗研究。實驗證明化合物1、2、3抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化水平，IC50分別為400、48、54 mM，VE及BHA IC50為295、222 mM?；衔?、2、3提高大鼠肝勻漿SOD活性，EC50分別為182、74、204 mM，BHA EC50為424 mM。另外，化合物1、2、3也具有清除DPPH活性，EC50分別為49、1233、55 mM，BHA EC50為110 mM。結(jié)

10、果提示化合物1、2、3具有體外抗氧化活性，其活性不僅取決于其提高抗氧化酶SOD活性，也由于其對DPPH自由基的清除作用。 3.石櫟木二氫查耳酮葡萄糖苷化合物的生物活性研究 3.1 體外抗氧化活性 三種甜味二氫查耳酮葡萄糖苷類化合物，即trilobatin2’’-acetate(1)、phlorin(2)和trilobatin(3)，是從石櫟木Lithocarpus pachyphyllus葉中提取分離得到的。其

11、中化合物3在葉中含量高達1﹪。為探討其體外抗氧化活性，本研究實驗測定了其對于大鼠肝勻漿中脂質(zhì)過氧化水平、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)及DPPH自由基的影響。結(jié)果顯示，化合物1、2、3均抑制大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化水平，IC50 分別為124.6、12.0、38.2 mg/mL，陽性對照BHA及VE IC50分別為40.4、127.2 mg/mL.化合物1、2、3不僅增強SOD活性(EC50分別為275.1、7

12、2.2、55.8 mg/mL，BHA為76.4 mg/mL)，而且提高GSH-Px活性(EC50分別為342.8、151.4、56.2 mg/mL，VE為112.6 mg/mL)?；衔?、2、3在清除DPPH自由基方面活性較弱(EC50分別為247.9、950.8、188.6 mg/mL，BHA為19.9 mg/mL)。提示化合物1、2、3主要通過提高抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化水平，從而具有較強的抗氧化活性，這種活性強弱與它的分子結(jié)

13、構(gòu)及取代基位置有關(guān)。 3.2 對高脂血癥小鼠的調(diào)節(jié)血脂及抗氧化作用 為進一步研究三個二氫查耳酮葡萄糖苷化合物在動物體內(nèi)生物活性，實驗建立高脂血癥模型小鼠(灌胃給予高脂乳劑，連續(xù)7天)，將受試物灌胃給予小鼠(連續(xù)7天)，測定血清或肝組織中總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、脂質(zhì)過氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平。與正常對照組比較，高脂乳劑

14、誘導的高脂血癥模型組的TC、LDL-C、LPO水平明顯上升，而HDL-C、SOD、GSH-Px水平明顯下降。與模型組比較，62.5，250 mg/kg化合物2、3明顯抑制高脂乳劑造成的TC、LDL-C上升，同時化合物2 (高、低劑量)及化合物3 (高劑量組)顯著升高HDL-C；另外，化合物1 (250 mg/kg)明顯降低LDL-C，而升高HDL-C。化合物1、2、3 (62.5，250 mg/kg)都明顯抑制高脂乳劑造成的血清和肝組織

15、LPO水平上升；與模型組比較，除了化合物3 (低劑量)外，其余各劑量 (62.5，250 mg/kg)的化合物均顯著升高血清或肝組織的SOD活性及GSH-Px活性(約為模型組的1－3倍)；并且三個化合物升高GSH-Px活性比VE強。另外，實驗還證明具有降血脂作用的陽性藥物非諾貝特(250 mg/kg，ig)具有抗氧化活性，而VE(250 mg/kg，ig)也具有一定降脂活性。結(jié)果提示化合物1、2、3對高脂血癥小鼠具有降脂及抗氧化作用。

16、 4.巖白菜素及其衍生物的生物活性初步研究 4.1 巖白菜素及其衍生物的止咳、祛痰活性初步篩選 本課題組成員通過修飾結(jié)構(gòu)，運用成熟的有機反應合成了系列巖白菜素衍生物，以期改變其油/水分配系數(shù)，增加療效，延長半衰期，篩選出部分鎮(zhèn)咳作用更強的衍生物。 本論文初步篩選研究了巖白菜素(1)及其衍生物(2，3，4)在動物體內(nèi)的止咳、祛痰活性。通過枸櫞酸溶液噴霧，反射性地引起豚鼠咳嗽，觀察巖白菜素(1)及其衍生物2、3、4(

17、ip)對化學性刺激引起咳嗽的影響。另外，毛細管法測定巖白菜素及其衍生物(ip)對大鼠痰液量分泌的影響。結(jié)果表明，巖白菜素及其衍生物2、4(62.5 mg/kg)明顯延長豚鼠噴霧枸櫞酸咳嗽潛伏期，巖白菜素及衍生物2明顯減少豚鼠枸櫞酸噴霧咳嗽次數(shù)，其中巖白菜素衍生物2對豚鼠噴霧枸櫞酸引咳的止咳活性較其巖白菜素、衍生物4效果更顯著。毛細管法測定大鼠痰液量實驗表明，巖白菜素及其衍生物2 (62.5、250 mg/kg) 劑量依賴性地明顯增加大鼠

18、痰液量分泌，但衍生物3、4高低劑量沒有明顯增加痰液量分泌。提示巖白菜素及其衍生物2具有增加大鼠痰液量的作用，從而具有祛痰效應，并且衍生物2作用較巖白菜素強。 5. 高脂血癥及動脈粥樣硬化動物模型及治療藥物研究進展 對近年來高脂血癥及動脈粥樣硬化動物模型研究進展進行了綜述，從病因上主要包括飲食型及轉(zhuǎn)基因動物模型，而從動物品系上包括了靈長類、兔、鳥類、嚙齒類的大鼠、小鼠等。另外，對高脂血癥及動脈粥樣硬化治療藥物進行了綜述，包括