RASSF1A基因?qū)θ宋赴㏒GC-7901細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定高表達(dá)RASSF1A人胃癌SGC-7901細(xì)胞株；探討RASSF1A基因?qū)θ宋赴㏒GC-7901細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的影響。
　　方法：利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將真核表達(dá)重組體pcDNA3.1-RASSF1A質(zhì)粒和空載體pcDNA3.1質(zhì)粒分別導(dǎo)入SGC-7901細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆，RT-PCR、Western blotting檢測(cè)RASSF1A基因表達(dá);采用丹麥Exiqon公司miRNA芯片分析高

2、表達(dá)RASSF1A基因的pcDNA3.1-RASSF1A-SGC-7901細(xì)胞株與空質(zhì)粒對(duì)照組pcDNA3.1-SGC-7901細(xì)胞株之間的miRNA差異表達(dá)情況，采用GenePix pro V6.0和Axon GenePix4000B分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)位點(diǎn)，挑選差異表達(dá)的miRNA中的三個(gè)miRNA(miR-181a、miR-181b、miR-711)并進(jìn)行miRNA qRT-PCR分析,進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA芯片結(jié)果。

3、　　結(jié)果：通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)成功建立穩(wěn)定高表達(dá) RASSF1A基因人胃癌SGC-7901細(xì)胞株；運(yùn)用miRNA芯片篩選轉(zhuǎn)染RASSF1A基因前后人胃癌SGC-7901細(xì)胞，篩選出14條差異表達(dá)的miRNA，其中上調(diào)的7條，分別為：miRPlus-E1153、miRPlus-E1225、miRPlus-E1133、miR-377、miRPlus-E1077、miR-711、miR-1207-3p；下調(diào)的7條，分別為：miR-330-5p、

4、miR-181a、miR-181b、miR-483-5p、miRPlus-F1086、miR-132、miRPlus-E1026；經(jīng)miRNA qRT-PCR驗(yàn)證miR-181a、miR-181b、miR-711的表達(dá)與miRNA芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論：1．高表達(dá)RASSF1A抑癌基因能導(dǎo)致SGC-7901細(xì)胞microRNA表達(dá)譜發(fā)生改變；
　　2．miR-181a、miR-181b、miR-711的表達(dá)異?？赡芘c胃癌的